研究用鱼指南|美国渔业学会BOB国际体育

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版权归美国渔业协会所有BOB中国官方下载BOB国际体育

建议引用:
鱼类在研究委员会(由美国渔业学会、美国渔业研究生物学家研究所和美国鱼类学家和爬行动物学家学会联合委员会)中的使用BOB中国官方下载。BOB国际体育2014.研究中使用鱼类的指南。美国渔业协会，马里BOB国际体育兰州贝塞斯达。

前言

BOB中国官方下载美国渔业BOB国际体育学会(AFS)、美国鱼类学家和爬虫学家学会(ASIH)和美国渔业研究生物学家学会(AIFRB)是专注于水生动物、渔业资源和水生生态系统的科学理解和全球保护、养护和可持续性的专业学会。它们的政策和立场主要基于通过科学实践获得的信息，但它们也反映了伦理关切，包括保护鱼类种群的多样性和丰度，以及尊重生命和生命过程。对鱼类、发现鱼类的环境、影响鱼类健康和福祉的因素以及依赖和/或影响鱼类的各种人类活动的研究调查是这三个社会的核心追求。此外，这些学会认为，其成员不仅有责任促进对鱼类和渔业的科学知识和理解，而且有责任提高人类对这些动物及其所支持的行业的认识。BOB国际体育这三个学会都积极促进研究和传播从研究中获得的资料。他们还提倡尊重生命过程，尊重各种生态系统中的生命形式，以及人道地对待用于研究调查的动物。

鱼类值得进行实验和观察研究:它们是环境质量和生态完整性的有用指标，它们的个体适应性和生理特殊化使它们适合用作生理学和生物医学模型。此外，通过娱乐和商业活动，鱼类在经济上具有重要意义，因为它们为人类和其他动物提供了重要的食物来源，是捕捞和观察的热门。

《鱼类研究使用准则》(以下简称《准则》)的作者都是科学家，尊重生命，受过多种学科的专业训练。AFS、ASIH和AIFRB支持当前版本指南的意图，以帮助调查人员、机构和监管当局对鱼类和鱼类栖息地进行负责任的、科学有效的研究。2004年指南(研究委员会2004年使用鱼类)通过包含与实验室研究相关的内容取代了野外研究中使用鱼类的指南(ASIH等，1987,1988)。当前版本是响应2004年定期审查和更新文件的呼吁，并在此提出了类似的建议。

使用多学科方法，即数据和专业知识来源于生态学、行为学、营养学、遗传学、毒理学、化学、内分泌学、生理学、解剖学和鱼类健康等学科，可以最好地理解和保护用于研究的动物。与此同时，了解研究是在各种人类文化背景下进行的是很重要的。理想情况下，基于科学研究的科学程序、分析方法、数据解释和结论在所有文化中都应该是一致的;然而，个人信仰系统可以并且确实影响有关哪些做法和方法符合或不符合人道对待动物的概念。2014年鱼类在研究中的使用(UFR)委员会的一些成员也是修订2004年指南(鱼类在研究中的使用委员会2004年)的委员会成员。2004年和2014年的《指南》不仅反映了UFR两个委员会的科学专业知识，而且为促进科学上有效的鱼类和鱼类栖息地研究以及以研究所在社会群体可接受的方式进行的研究提供了框架。

《准则》涉及鱼类的实地和实验室研究，并将作为专题的参考文件。针对美国法律的具体信息是这里的重点，但这些指南可以由在自己的动物护理和使用委员会的机构基础设施内工作的调查人员在国际上应用和调整。包括各种网站和文件的互联网路径链接;然而，这种通往网络媒体的途径可能会改变。如果读者在访问特定网站时遇到困难，请联系AFS出版总监(电子邮件保护)．

致谢

制定2004年和2014年指南的UFR委员会通过开发、更新和修订章节，慷慨地贡献了他们的时间和专业知识。我们感谢Linda Broussard, Jennifer Duke-Sylvester, Cassie Thibodeaux和Heather Birdsong(美国地质调查局[USGS]，国家湿地研究中心[NWRC])， Tiffany Smoak(学生承包商，NWRC)， Meghan Holder(承包商，五河服务公司，NWRC)， Katelyn Porubsky(原USGS科学出版网络)对引用的帮助，C. Victoria Chacheré (USGS科学出版网络)的编辑和格式工作，以及NWRC的支持。我们感谢同行评稿人:美国地质调查局的Vicki Blazer，美国鱼类和野生动物管理局(USFWS)的Marie Maltese，太平洋西北国家实验室的Richard Brown和David Geist，俄勒冈州立大学的Carl Schreck和美国地质调查局，德克萨斯州立bob娱官网入口大学的Joe Tomasso，挪威海洋研究所的Howard Browman和南伊利诺伊大学的Jesse Trushenski的贡献。我们感谢英国斯塔福德岛兽医协会有限公司的Chris Walster和匈牙利戈多洛Szent István大学的Akos Horvath提供具体国家的信息。感谢ash特设委员会的仔细审查和见解:Hank Bart(主席)，James Albert, Barry Chernoff, Bruce Collette, David Greenfield, Dean Hendrickson, Karen Martin, Edie marshall - matthews, Jacob Schaefer和Jacqueline Webb。感谢AFIRB管理委员会和Steve Cadrin主席。最后，我们感谢AFS前任主席Bill Fisher任命现任UFR委员会和现任主席Robert Hughes，帮助AFS继续其促进健全科学和传播基于科学的渔业信息的传统，以促进全球渔业资源和水生生态系统的保护、养护和可持续发展。BOB国际体育我们也感谢AFS理事会和Hughes博士的仔细审查。任何贸易、产品或公司名称的使用仅用于描述目的，并不意味着得到美国政府的认可。

尊重,

吉尔·a·詹金斯，UFR委员会主席，2014年

目的声明

制定2004年和2014年的指南是为了提供一种结构，在确保对实验对象的人道待遇的同时，适当关注有效的水生动物实验设计和程序。在实践层面，《准则》旨在提供关于实地和实验室工作的一般性建议，例如鱼类取样、饲养和处理;提供有关行政事项的资料，包括条例和许可证;并解决典型的伦理问题，例如实验对象对疼痛或不适的感知。这些指南必须被认可为的指导方针．它们的目的不是提供详细的说明，而是提醒研究人员在开始研究之前要考虑广泛的主题和问题。综合而言，本指南所依据的原则广泛适用，所述的许多做法和方法可适用于涉及其他水生动物物种和条件的情况。

了解鱼类与其他脊椎动物，特别是哺乳动物之间的差异，对于进行科学合理的鱼类研究至关重要。鱼类与其他脊椎动物的生活史和死亡率差异对于设计可持续的鱼类种群采样水平至关重要。UFR委员会指出:(1)与哺乳动物种群相比，许多鱼种的成鱼种群尽管在幼鱼阶段的自然死亡率很高，但由于大多数鱼种产卵数以千计或数万个，因此成鱼种群仍然存在;(2)由于这些死亡率模式，对鱼类的研究，特别是对早期生命阶段的实地研究或研究，可能涉及而且往往需要比哺乳动物研究多得多的研究对象;(3)一般来说，鱼类的动物处理和饲养要求与哺乳动物和其他脊椎动物有根本不同。为研究哺乳动物、鸟类、爬行动物甚至两栖动物而制定的政策、法规和建议往往不适用于鱼类研究。《准则》还考虑到鱼类的独特生理和一般性质，解决了一些促进其他脊椎动物研究准则的伦理问题。

该指南是为美国境内的调查人员一般使用而制定的;因此，机构动物护理和使用委员会(IACUCs)的角色、责任和信息需求得到了特别关注。所有使用脊椎动物进行研究、教学、研究培训和生物测试的美国机构都必须创建一个IACUC，以监督和评估该机构动物护理和使用项目的各个方面。阅读本文件的其他国家的调查人员可能会忽略美国州和联邦法律法规的具体引用，因为他们的机构基础设施和流程可能与IACUCs等内部委员会不同。然而，本文所述的原则适用于对鱼类的研究，而不受地理位置的限制。其他国家的调查人员可以通过修改与美国有关的任何具体条款而受益，从而采用与本国政府法律法规一致的指导方针。UFR委员会敦促对鱼类负有监管责任的州和联邦当局、联邦监督机构(例如，国家卫生研究院、实验动物福利办公室;http://grants.nih.gov/grants/olaw/olaw.htm)以及大学和其他机构和当局在其研究和教学项目中使用鱼类和水生动物。

1.简介

使用活的、完整的生物体的实验研究继续在发展知识和更好地理解生命过程、生命形式及其发生的环境方面发挥着重要作用。鱼类的巨大进化辐射包括至少27,000个物种(Nelson 2006)。鱼类以多种形式存在，有许多独特的生理、行为和生态特殊化。鱼类在几乎每一种水生栖息地中都占有不同的生态位。如果没有完整的活体动物实验，就无法理解它们的生物学特性。

研究鱼类的原因有以下几点:鱼类是环境质量和生态完整性的有用指标;鱼类是世界上许多人类和陆生动物的重要食物来源，也是其他水生动物的重要食物来源;鱼类是水生环境和生态系统的重要组成部分;捕捞和观察鱼类对全世界数百万人来说是非常受欢迎的、具有重要经济意义的娱乐和商业活动;鱼的独特适应性和生理专门性使它们特别适合用作生理学和生物医学模型;人类努力了解各种生物在地球生态系统中扮演的角色，必须包括对鱼类生物学的准确和详细的知识。

27000多种鱼类所表现出的多样性为新研究创造了许多机会，但这也使得制定适用于所有物种和所有情况的研究方案成为不可能的任务。相反，在《指南》中提供了以最新的、科学有效的信息为基础的广泛指南，供各种研究人员解释和应用，这些研究人员往往是他们所研究的物种或系统的权威。研究人员对每项研究及其所用方法的伦理和科学有效性负有最终责任;然而，反映公民信仰和价值观并代表公民行事的政府机构，经常要求调查人员遵守规定可接受的策略、技术、设施、条件和用于研究的动物实验后处置的规范。

一些人认为，鱼类不应该包括在主要针对哺乳动物和鸟类的法律和政策中;然而，1985年的《卫生研究推广法》(1985年第99-158号公法)http://history.nih.gov/research/downloads/PL99-158.pdf)包括其管辖范围及职责范围内的鱼类。关于1985年的HREA和关于人道照顾和使用实验动物的公共卫生服务政策的其他信息(实验室动物福利办公室，2002年，http://grants.nih.gov/grants/olaw/references/phspol.htm)可通过美国卫生与公众服务部(USDHHS;http://www.hhs.gov/美国国立卫生研究院;http://www.nih.gov/)校外研究办公室(OER;http://grants.nih.gov/grants/oer.htm)．鱼类被特别包括在实验动物研究研究所(ILAR)的《实验动物护理和使用指南-第八版》(NRC 2011)的范围内。http://www.aaalac.org/resources/theguide.cfm)，国家科学院国家研究理事会地球与生命研究部。法律和其他指南，如ILAR指南(NRC 2011)提供了关于鱼类或其他变温动物的一般材料。ILAR指南特别要求知识渊博的团体开发详细的信息。一般来说，在特定脊椎动物类别方面具有专门知识的科学学会被认为是执行现有政策所需补充信息的最适当来源。

2004年以前版本的《鱼类野外研究使用指南》是由美国鱼类学家和爬虫学家学会(ASIH)、美国渔业学会(AFS)和美国渔业研究生物学家学会(AIFRB)共同制定和出版的(ASIH等，1988,1988)。BOB国际体育1987年和1988年指南强调实地研究，2004年指南增加了关于鱼类实验室研究的材料。因此，2004年准则的制定是为了响应公共卫生局(PHS)扩大其对“动物”的定义，包括用于研究或拟用于研究的活脊椎动物(公法99-158)。2014年指南扩展了2004年指南，更新了过去十年提出的新知识和信息。协助调查人员准备机构动物护理和使用委员会(IACUC)申请的清单保留在这些2014年指南中(见附录)．

2.一般考虑

某些一般性考虑适用于几乎所有关于鱼类的研究调查，无论是在实地进行还是在实验室进行。本节介绍的概念和程序，可以适用于每个调查人员的情况和环境。

研究性研究应该有充分理解和合理的目标，在研究学科的范围内，解决对我们所生活的世界和所考虑的特定资源的基本知识和理解的需求。如果要研究的鱼类的生物学是众所周知的，则应明确提出研究假设，以便对鱼类的使用集中于解决该假设。如果一个鱼类物种的生物学不为人所知，对鱼类的一般采样和其他观察用途(即，不是假设驱动的)可能有必要指导一个好的研究假设的发展(见节)5.2字段收集)。研究质量依赖于可以用科学方法解决的仔细沟通的问题，依赖于质量控制、可发表和可重复的研究程序的发展。已经发布了改进动物研究报告和提高可重复性的指南(Kilkenny et al. 2010;参见到达指南，http://www.nc3rs.org.uk/page.asp?id=1357；参见3.1国际法规和指南)．

研究结果的有效性受到实验设计、所采用的分析程序以及实验对象的质量和健康状况的影响。所用鱼类的种类和个体的质量和适当性会严重影响结果和结论，从而对所需的动物数量和重复研究的次数产生巨大影响。反过来，这些影响将对动物福利和经济产生重要影响。研究科学家们早就认识到动物福利的重要性;然而，在1985年之前，在研究中使用鱼类的正式指导方针在美国并不常见，当时要求研究提案获得IACUC的批准(公法1999 -158 1985，http://history.nih.gov/research/downloads/PL99-158.pdf)．虽然本指南中描述的原则和程序是为满足美国IACUCs的要求而设计的，但一般概念适用于全球各地的调查人员。

2.1 IACUCs对研究计划的批准

当需要IACUC的批准时，调查人员必须准备书面声明或动物使用请求，以确保所有申请、提案和实际研究都符合某些基本要求(Silverman et al. 2007)。保障措施包括限制不必要的研究重复，使用适当的动物种类和数量，适当的实验设计，以及在研究完成后安乐死或处置动物的方法。调查人员必须熟悉所要研究的物种，或与之密切相关的替代物种，以便能够为实验对象的健康提供必要的环境条件，并能够识别它们对干扰的反应，包括捕获、约束或其他可能适用于特定研究的环境条件变化。IACUC批准的研究计划的副本由IACUC从赞助机构以及由个人研究者保存。

联邦法律、法规和政策要求IACUC对协议的批准后监测;允许修改研究程序/协议;并确保动物们的健康。

2.2工程质量保证计划和标准操作程序

项目质量保证计划(PQAPs)和标准操作程序(SOPs)虽然不是许多大学或非政府机构所要求的，但仍然被推荐作为保持整体研究质量的有用工具。如果研究数据和结论将提交给某些监管机构，如美国食品和药物管理局(FDA，http://www.fda.gov/)或美国环境保护署(EPA，http://epa.gov/)．

PQAP应该包括对项目设计和解决问题的方法的描述，对预期可交付成果的陈述，以及对如何报告数据的描述(例如，作为单独的测量或以简化的形式)。PQAP记录了在整个研究项目中确保适当质量过程的原则、政策、组织职责、目标、实施行动和问责程序。动物护理紧急联络人和应急计划可包括在PQAP中。重要的是，PQAP应描述用于控制/验证实验程序的措施，并确保所获得的结果能够代表所评估的实验参数。PQAP应确定如何控制未经授权的实验室人员或研究项目区域并维护生物安全。对于涉及现场抽样的研究，PQAP应包括一个抽样计划，概述方法、设备和程序，以及人员的安全程序。在实验室研究中，应规定样品制备和分析方法。对于常规的、专门化的或未发布的方法，应该确定标准操作规程。应为每个测量参数确定数据质量目标，并应说明在现场或实验室条件下使用的质量控制程序。如果出现问题，应规定纠正措施。 Finally, a quality assurance (QA) report should be generated at the conclusion of the study. This report should include a summary of the PQAP, results of technical systems and performance evaluation audits, corrective actions taken and results of those actions, data quality assessments (precision, accuracy, representativeness, completeness, comparability, and reporting limits), a discussion of whether the QA objectives were met, and limitations on use of data collected during the research.

sop记录常规的或重复的技术活动，或者那些偶尔发生但需要以与前一次完全相同的方式进行的活动。理想情况下，sop可以确保工作第一次就正确完成，从而减少不必要的重复和成本。如果研究数据是在使用相同程序但人员随时间变化的环境中生成的，则标准操作程序有助于保持一致性。一些机构要求标准操作程序，以确保求职者能够完成所需的任务。标准操作程序也可以成为有效培训计划的重要组成部分。一般的标准操作程序，不专门针对个别研究，可以作为整个研究实验室或机构的基本程序。标准操作程序在对鱼类进行研究时有用的具体技术任务的例子包括血液取样、疫苗接种方案、电捕鱼程序、用于镇静的溶液的制备以及收集分生数据的技术。在研究方案中要求遵守sop和pqap的政策是为了允许开发新程序和修订或扩展已建立的程序，从而开发新的研究技术。关于标准操作程序和pqap的更多信息可在EPA的指导文件中获得(EPA 2007，标准操作程序编制指南[SOPs]，http://www.epa.gov/quality/qs-docs/g6-final.pdf，或EPA 2002《质量保证项目计划指南》，http://www.epa.gov/quality/qs-docs/g5-final.pdf)或FDA(关于质量保证和标准操作程序的各种问题和答案包括在FDA 2007，行业良好实验室操作指导问题和答案，http://www.fda.gov/downloads/ICECI/EnforcementActions/BioresearchMonitoring/UCM133748.pdf)，以及各种有关质量保证的手册或文本。此外，美国鱼类和野生动物管理局(USFWS，http://www.fws.gov/)水生动物药物审批伙伴计划(http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/home.htm)设有网上标准操作程序(http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/AADAP_Protocols_and_SOPs.htm)．

2.3统计设计

在研究中使用动物所固有的责任是高效、有效地设计实验研究，其中健康的动物没有异常的外貌和行为将有助于研究结果，以及人道地对待实验对象(Klontz和Smith 1968;Snieszko 1974;Klontz 1995;2011年NRC)。应明确说明研究目标，并解释需要收集的数据类型和数量，以及实验的结束。

一项调查所需的动物实验对象的数量将取决于正在探索的问题。实地研究和实验室研究通常需要非常不同的统计设计。每项研究中使用的鱼的生命阶段也会影响所需的数量。早期生命阶段的研究可能需要大量的个体。在任何情况下，研究都应该设计成使用最少的动物来可靠地回答所提出的问题。使用足够的数字来建立方差并确保可靠性是必要的，以防止不必要的重复研究(ASIH et al. 1987,1988)。真正的“复制”是最小的实验单元，可以独立地对其应用一种治疗方法。错误地将一个实验单元的多个样本视为多个实验单元，或者使用统计上不独立的实验单元，都可能导致假复制(Heffner et al. 1996)。统计功率分析可以改进实验设计(Peterman 1990)。进行统计力量分析可以确保研究设计的发展具有适当的统计力量来完成研究目标。

2.4死亡率作为实验终点

在实验室研究中，除实验对象的死亡外，应制定实验终点，除非研究方案要求死亡率。当满足以下一个或两个标准时，使用死亡率作为终点是合适的:(1)与研究目标相关的物种或被施加的实验变量的信息很少或没有(例如，短期的、有限的死亡率研究可用于制定后续亚致死研究的实验极限);(2)赞助机构需要或至少首选死亡率数据，以作为监管过程的一部分，为标准制定提供基础。需要死亡率终点的研究包括但不限于与病原体和寄生虫的影响、毒理学研究和生理耐受性有关的研究。

2.5鱼类健康管理:病原体和寄生虫的控制

在涉及鱼类的实验室研究中，健康的受试者是获得可靠数据的先决条件(Jenkins 2011a)，除非传染病是实验方案的一部分。用于研究的鱼必须没有任何明显的微生物存在，这可能表明疾病状况。没有传染性鱼类病原体的鱼通常是令人满意的;然而，一种未被识别的疾病状况，即使是慢性或非致命水平，也会严重混淆研究结果(Lawrence et al. 2012)。研究用鱼的来源一般会影响它们的健康状况。人工饲养的鱼有一定程度的健康监督，而野生捕捞的鱼则没有。在询问养殖设施中鱼类的健康状况时，研究人员可以要求提供具体信息，包括任何可用的鱼类健康检查报告。当鱼类从野外被带到实验室时，研究人员应该预料到微生物的存在。如果没有明显的疾病症状，这并不能保证这些野生捕捞的鱼没有问题的疾病有机体。一旦这些鱼被置于实验室环境中，培养条件和相关的应激源将与自然环境中的非常不同，从而可能发生活动性疾病事件。 Many laboratories will administer formalin baths to newly arrived fish during an acclimation period (see section7.3适应实验室条件)．目的是消除鱼体内的外来原生动物和单基因生物。不建议对鱼进行常规抗生素治疗细菌病原体，因为这种做法可能会导致抗生素耐药细菌的发展。

任何在实验室环境中死亡的鱼都应由具有鱼类健康专业知识的个人进行适当的诊断评估。确定这种死亡的原因将大大有助于制定设施的卫生管理规程。对于长期维持的实验室鱼类群体，可以建立监测计划，其中定期选择有限数量的鱼类进行诊断评估，以确定是否存在任何有问题的病原体。与对死亡率进行诊断评估一样，通过监测工作获得的数据将提供关于菌落中是否存在病原体的有价值的信息，以便采取适当的管理措施以限制任何影响。研究人员应咨询具有鱼类健康专业知识的个人和/或负责其设施健康管理的兽医以获得进一步信息。

事实上，在人工饲养和野生捕捞的鱼类中，研究人员可能会发现各种传染性生物。这种传染性生物的存在可能不会导致疾病或阻止在研究中使用宿主鱼，但必须评估它们存在的相对重要性，以确定对研究结果的可能影响(Winton 2001年)。可能需要对特定病原体或寄生虫进行检测。诊断程序不断改进，并允许更大的信心，关注的病原体不存在或存在的数量不足以影响研究结果的准确性或可靠性。除了某些特殊情况外，认为所有鱼类都“无病原体”可能是不现实的。在与鱼类健康专家或兽医协商后，应采取措施解决任何鱼类健康问题，以保证鱼类的健康和福祉，并支持研究。

如果疾病状况是实验设计的一部分，病原体或寄生虫对研究结果的潜在影响应该是可预测的或构成正在通过研究进行测试的变量。如果在研究开始之前用治疗性化合物治疗鱼类的疾病，在足够的时间过去以消除治疗的任何残留物之前，不应该使用它们。在设计研究和分析从该研究中获得的数据时，必须考虑到处理对试验鱼的代表性地位的任何其他影响。

如果试验鱼类要治疗疾病，应使用FDA批准的药物，并遵循当前的FDA法规(联邦法规[CFR] 2012)，尽管FDA对在实验室环境中进行的研究提供了相当大的灵活性。此外，兽医可以在某些情况下开出标签外使用药物的处方。必须遵守有关药物管理的机构、地方或州指导方针，还必须遵守有关可能含有药物的废水排放的EPA、州和地方法规。46 .联合防治疾病委员会认识到，过去使用的许多药物和疾病治疗方法在防治疾病迹象方面取得了一定程度的明显成功;然而，UFR委员会认为，在使用任何未获得FDA批准的药物时都应非常谨慎。有些化合物目前未获批准，但可合法获得用于鱼类(例如，列入合法销售的用于小物种的未经批准的新动物药物索引的产品，在研究新动物药物[INAD]豁免下使用的药物)。此外，在满足某些条件的情况下，可以使用未经批准的“低监管优先级”(LRP)药物(FDA 2011;看到附录表1)．请参阅7.13药品、生物制剂和其他化学品的管理，以了解有关在鱼类中使用药物的更多详细信息。这里没有列出一份似乎有效但尚未批准的药物清单，因为这样做可能会被误解为支持未经批准的药物。用未经FDA批准的物质处理过的鱼类不得放生或食用。

所有疾病治疗的完整记录必须保存，因为FDA检查人员可能会下令审查这些文件。经批准的治疗化合物有信息表或标签，具体说明该物质与鱼类的使用指南。旨在研究疾病治疗的有效性、对鱼类的安全性、人类安全或环境安全的研究应与FDA兽医医学中心协商并最终获得他们的同意。如果这些鱼最终可能被释放，或者它们可能成为人类消费的食品，那么必须详细遵守FDA的规定。其他资料可从食品及药物管理局的网站(http://www.fda.gov/)及环保署(http://www.epa.gov/)．

3.法定规定及规管机构

研究者必须了解与所研究动物相关的所有法规，以及生物安全问题，并且必须获得进行拟议研究所需的所有许可(ASIH et al. 1987,1988)。合规的责任在于机构，最终在于首席研究员。

3.1国际法规和指南

在美国境外工作的研究人员应遵守研究所在国的所有野生动物法规。涉及许多物种的工作受到《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES;http://www.cites.org/)，这是一项国际协定，旨在确保野生动植物标本的国际贸易不会威胁到它们的生存。《濒危物种国际贸易公约》提倡“野生动植物以其许多美丽和多样的形式是地球自然系统中不可替代的一部分，必须为这一代和后代加以保护”(CITES 1979，http://www.cites.org/eng/disc/text.php)．交易范围从活的动物到大量的野生动物产品，包括鲟鱼鱼子酱。CITES网站包括一个物种数据库和地图。根据世界自然保护联盟成员在1963年通过的一项决议，该公约的文本于1973年在华盛顿特区定稿。成员国(缔约方)自愿加入，当他们“加入”CITES时，他们在法律上有义务执行公约。但是，《公约》的条例不能取代国家法律;相反，它们提供了每个缔约方都要遵守的框架。然后，各缔约方通过自己的国内立法，以确保CITES在国家一级得到执行。

动物和动物产品的国际贸易需要制定旨在防止传染性疾病向动物个体、动物群体之间和人类传播的法规(Jenkins 2011年1b)。在野生动物转移之前，应评估疾病风险并采取预防措施以尽量减少风险(Cunningham 1996)(见3.2节生物安全和7.2禁闭、隔离和检疫)．世界动物卫生组织(前身为国际兽疫局;世界动物卫生组织,http://www.oie.int/)成立于1924年，总部设在巴黎，一直是制定国际动物卫生标准的领导者，目前有近200个国家的成员。重点包括全球动物健康和疾病以及兽医科学信息的传播。他们出版了两份守则(陆地和水生)和两份手册(陆地和水生)。两份守则旨在确保动物及其产品国际贸易的卫生安全。水生动物卫生规范(OIE 2012a，http://www.oie.int/en/international-standard-setting/aquatic-code/)涉及动物卫生和人畜共患病、动物生产、食品安全和动物福利。水生动物诊断试验手册(OIE 2013，http://www.oie.int/en/international-standard-setting/aquatic-manual/access-online/)描述国际公认的实验室技术。(见附录表2参阅世界卫生组织鱼类和两栖动物须呈报的疾病清单。)

经济合作与发展组织(OECD)http://www.oecd.org/)，总部设在巴黎，有34个成员国，推动旨在改善经济和社会福祉的政策。经合组织的出版物涉及渔业和渔业政策，主题包括渔业全球化和毒理学测试准则。BOB国际体育这些出版物考虑到可持续社区和动物福利问题。年度报告、通讯、工作文件、指导方针、最佳做法和法律文书可通过经合组织网站查看。

各国可通过联合国粮食及农业组织(粮农组织、BOB国际体育http://www.fao.org)、亚太经济合作组织海洋及渔业工作BOB国际体育小组(亚太经合组织bob娱官网入口http://www.apec.org)，以及南极海洋生物资源保护委员会(CCAMLR，http://www.ccamlr.org)．为特定国家编写的指南可以通过与这些国际权威机构联系来研究。

在欧盟(EU)， 27个国家的活动和伙伴关系以法治为基础，条约和有约束力的协议得到维护。对于用于科学目的的活体动物的护理和使用，欧盟委员会(欧盟的执行机构)推广了“3R”原则，即替换、减少和改进。“3R”原则旨在促进替代方法，减少动物使用，并完善动物程序(欧盟2010;参见2.一般考虑)．本立法旨在消除成员国在保护实验和其他科学目的动物方面的法律、法规和行政规定之间的差异，从而减少涉及研究产生的产品和物质的贸易壁垒。提供了脊椎动物的具体指南。第49条规定，每个成员国应建立一个国家委员会，以保护用于科学目的的动物。委员会将在科学程序中就动物的获取、繁殖、饲养、护理和使用提供建议，从而确保最佳实践的使用和共享(欧盟2010年)。例如，1998年匈牙利关于保护和人道对待动物的第XXVIII号法案修正案规定了将动物用于科学研究(1998年第XXVIII号法案;第243/1998号政府法令31日)1998;农业和区域发展部、环境部和经济部第36/1999号联合法令(IV.2) 1999年)。欧盟法律范围内的文件可在网上查阅(http://eur-lex.europa.eu/)．在英国，更新后的《2006年动物福利法》(环境、食品和农村事务部[Defra] 2006年)涵盖了包括鱼类在内的所有脊椎动物。根据该法案第59项，与捕捞和上岸有关的垂钓不包括在内;然而，经营渔业的责任和其中鱼类的福利不排除(Defra 2006)。环境、渔业和水产养殖科学中心BOB国际体育http://www.cefas.defra.gov.uk/)是Defra的一个执行机构，与科学实体合作，提供基于科学的建议，进行研究，并促进国际关系。一个额外的资源是鱼类兽医协会(FVS，http://www.fishvetsociety.org.uk/)，是一个为兽医、鱼类健康专业人士和兽医专业学生举办的论坛。FVS促进多种环境下的鱼类护理和健康管理，包括观赏鱼类。

在澳洲，农业部(http://www.daff.gov.au/)在促进澳大利亚渔业的生物、经济和社会可持续性方面发挥着重要作用，并为渔业界提供大量服务和资源，包括进出口国家的生物安全问题。BOB国际体育渔业研究BOB国际体育与发展公司(FRDC，http://frdc.com.au/research/Pages/default.aspx)是政府与渔业和水产养殖业为澳大利亚研究伙伴建立的伙伴关系。澳大利亚渔业管理局(AFMA，BOB国际体育http://www.afma.gov.au/)确定研究的优先次序(http://afma.gov.au/resource-centre/reesearch/research/)，有关法例及政策大多在1990年代界定(http://www.afma.gov.au/about-us/legislation-and-policy/)．

在加拿大，加拿大动物保护委员会(CCAC，http://ccac.ca/)监督在科学中合乎道德地使用动物。CCAC由来自20多个国家组织的代表组成的理事会管理，是一个“准监管”机构，通过指导文件和政策声明制定科学使用动物的标准。CCAC关于鱼类护理和使用的指引(CCAC 2005，http://ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Fish.pdf)是为了应对越来越多地使用鱼类作为实验对象而开发的。加拿大食品检验局(CFIA，http://www.inspection.gc.ca)及加拿大渔BOB国际体育业及海洋部(http://www.dfo-mpo.gc.ca)负责制定鱼类病原体的控制准则。

3.2生物安全

生物安全可以通过多种方式定义(Falk et al. 2011);它是采取预防措施，最大限度地减少传染性生物引入和传播到人群或人群中的风险的过程。粮农组织将生物安全定义为一种综合性战略方法，包括分析和管理食品安全、动物生命和健康以及植物生命和健康领域风险的政策和监管框架，包括相关的环境风险。粮农组织宣布，“生物安全包括植物病虫害、动物病虫害和人畜共患病的引入，转基因生物及其产品的引入和释放，以及外来入侵物种和基因型的引入和管理”(粮农组织2013年，http://www.fao.org/biosecurity/)．疾病的发生取决于动物的健康状况、环境状况以及病原体的存在程度是否足以对健康产生负面影响(见节)7.2禁闭、隔离和检疫)．“生物安全”一词也与环境生物多样性有关。一般来说，法规，适当的许可证(见章节3.4许可证和证书)，以及在一个国家内有关生物安全的其他具体问题在本文所述的指导文件中予以解决。新西兰由于其独特的地理隔离和农业经济基础，有大量处理生物安全问题的立法(1993年生物安全法)。

在各种情况下，与鱼类打交道时，生物安全是一个值得关注的问题。这些包括国家、地区、国家和国际鱼类和鱼类产品的转让、水产养殖生产和观赏业。Scarfe(2003)描述了全球一级生物安全的实施和在其中工作的组织。由于诊断技术和流行病学和发病机理知识的进步，生物安全是一个动态的学科。当考虑到冷冻保存的配子和水生物种的早期生命阶段时，生物安全实践使人工产卵方法能够安全地传递遗传。问题包括疾病传播、外来物种引进、对目标物种的遗传后果以及对生态系统的遗传后果(Tiersch和Jenkins 2003)。档案样本中的微生物(见5.9节血液和其他组织的收集)可能通过降低细胞质量而危及宝贵的种质资源(Jenkins 2011b)。病原体控制策略是作为生物医学模型使用的小鱼模型，特别是斑马鱼所关注的问题鱼类(也被称为斑马danio鲐鱼类)、日本美加Orzyias latipes和属的种Xiphophorus(Lawrence et al. 2012)。当代处理水生动物和水产养殖产品转让的国际和国家监管框架、条约、伙伴关系和协议可以作为监督特定环境所固有的独特的时间和地理生物安全问题的机制。一些国家可能已经制定了有关哺乳动物人工授精行业活动的法规，这些法规可能与世界动物卫生组织的建议和欧盟的要求一致。此外，核心机构生物安全租户在实现遵守国际法规方面可能是必要的。

3.3联邦、州和地方法规

在美国，使用动物进行研究的联邦权威主要有两个机构:美国卫生与公众服务部(HHS;http://www.hhs.gov/)和美国农业部(USDA;http://www.usda.gov/wps/portal/usda/usdahome)．如涉及濒危、受威胁或拟列入名单的物种，美国内政部(http://www.fws.gov/endangered/)或美国商务部(http://www.nmfs.noaa.gov/pr/)拥有额外的权力。每个部门的权力都在国会的具体法案中。公共卫生服务的立法授权;http://www.usphs.gov/《1985年健康研究推广法》(1985年第99-158号公法)规定了在研究中使用动物的政策。http://history.nih.gov/research/downloads/PL99-158.pdf)．该法案责成卫生与公共服务部部长负责制定指导方针，以适当照顾和治疗用于研究的动物，并组织和运作动物照顾委员会。在该法案中，“动物”被定义为“用于或拟用于研究、训练、实验或生物测试或相关目的的任何活脊椎动物。”小卫生局关于人道照顾及使用实验动物的政策(实验动物福利办公室2002，http://grants.nih.gov/grants/olaw/references/phspolicylabanimals.pdf)，于1985年颁布，其中包括美国政府关于用于测试、研究和训练的脊椎动物的利用和护理原则。这为根据小灵通政策进行研究提供了一个框架。PHS要求机构使用《实验动物护理和使用指南》(NRC 2011，http://www.aaalac.org/resources/theguide.cfm)．

由美国农业部规定的动物福利立法授权包含在动物福利法(AWA)中，经修订(7 USC, 2131-2156)。1970年AWA修正案(1970年公法91-579，http://awic.nal.usda.gov/government-and-professional-resources/federal-laws/animal-welfare-act)扩大了动物名单，包括所有由农业部长确定的用于或拟用于实验或展览的温血动物，但不用于研究的马匹和用于食品和纤维研究的农场动物除外。虽然鱼类不包括在AWA中，但调查人员应该熟悉AWA的一般内容和意图。完整的AWA，包括1966年颁布后的所有修正案(1970年、1976年、1985年和1990年)，可在《美国法典》(2012)中找到。美国农业部实施AWA的规定可以在CFR(2013)中找到。有关鱼类福利的信息来源汇编可从美国农业部获得(Erickson 2003，http://www.nal.usda.gov/awic/pubs/Fishwelfare/fishwelfare.pdf)．

美国农业部动物福利信息中心(http://awic.nal.usda.gov/)是由美国动物协会授权的，旨在为改善动物护理和在研究、测试、教学和展览中的使用提供信息。美国农业部介绍了IACUC的建立，并对其角色、组成和责任进行了描述(副署长办公室，国家计划工作人员，2002年，http://www.afm.ars.usda.gov/ppweb/PDF/130-04.pdf)．与生物医学研究和两栖动物、鱼类和爬行动物模型相关的信息源汇编(Crawford et al. 2001，http://www.nal.usda.gov/awic/pubs/amphib.htm)．在退伍军人事务部管理涉及实验动物的研究、测试和教学活动的原则和程序是可用的(退伍军人健康管理局2011年，http://www.va.gov/vhapublications/ViewPublication.asp?pub_ID=2464)．鸟类学委员会在线发布了野生鸟类研究使用指南(Fair et al. 2010，http://www.nmnh.si.edu/BIRDNET/guide/index.html)，美国哺乳动物学家协会(American Society of哺乳动物学家)有一个关于在研究中使用野生哺乳动物的计划(Sikes et al. 2011，http://www.mammalsociety.org/uploads/committee_files/Sikes%20et%20al%202011.pdf)．

1985年食品安全法，副标题f -动物福利(1985年第99-198号公法)http://awic.nal.usda.gov/public-law-99-198-food-security-act-1985-subtitle-f-animal-welfare，也被称为《改进实验动物标准法案》(Improved Standards for experimental Animals Act)，它在卫生、住房和通风等细节方面提出了最低要求。该法案规定，可能造成痛苦的程序(见第4节)。动物福利考虑因素)在实验程序中应尽量减少，并且该程序的替代方案应由主要研究者考虑。条例亦订明消除或尽量减少不必要的重复动物实验，以减轻公众对实验动物护理和治疗的关注。

各州和部落当局可能有具体的立法法规，授权他们管理在研究中使用动物。通常情况下，这些规定可以在有关自然资源、卫生和鱼类和野生动物农业利用的法律中找到，并可通过适当的州政府机构获得。鱼类的州际运输，以及在某些情况下的州内运输，由州一级加以管制。敦促调查人员确定哪些法律适用于他们的研究行为。地方当局很少监督研究的进行;然而，研究人员应该认识到可能存在与他们的研究相关的地方法规。

3.4许可证和证书

除了有关开展研究的政府法规外，跨州或国际边界运输动物(见3.2节生物安全)和从密闭作业中排放废水(见节)通常都需要获得许可7.9污水和许可证)．在美国，跨州运输鱼类的权力通常属于各州渔业和狩猎机构的管辖范围，就像钓鱼或其他方式的“捕捞”需要许可证一样(见第5.2节现场收集)。跨州运输或装运，接收货物，有时用于州内运输，可能需要文件。伤害性或侵入性物种通常需要许可证。USFWS是进口商和出口商的资料来源(http://www.fws.gov/le/ImpExp/Info_Importers_Exporters.htm)．有关法例(http://www.fws.gov/permits/ltr/ltr.html)、联邦登记册文件(http://www.fws.gov/permits/FederalRegister/FederalRegister.html)和条约(http://www.fws.gov/laws/lawsdigest/treaty.html)，以协助保存受保护的资源。其中许多条款直接适用于渔业调查人员，包括《濒危野生动植物种国际贸易公约》、《西北大BOB国际体育西洋渔业条约》(《西北大西洋渔业国际公约》[ICNAF] 1 u.s.t 477;T.I.A.S. 2089)和《五大湖条约》(美国和加拿大五大湖渔业公约;BOB国际体育6 u.s.t 2836;T.I.A.S. 3326)(有关这些条约和其他条约的资料可在http://www.fws.gov/laws/lawsdigest/treaty.html)．

在某些情况下，对鱼类的州际和国际流动的管辖权可能属于动植物卫生检验局(APHIS)，http://www.aphis.usda.gov/)。这些条例的目的是防止引进外来病原体，并解决与濒危或受威胁动物物种有关的问题。处理活鱼、死鱼及配子进口的指引载于《CFR 2008》第50条(野生动物及渔业)第16部(BOB国际体育http://www.ecfr.gov/cgi-bin/retrieveECFR?gp=1&SID=7a0d8ba4c403a707edcd008028e3e519&ty=HTML&h=L&n=50y1.0.1.2.10&r=PART)．《莱西法案》(2010年美国法典;http://www.gpo.gov/fdsys/pkg/USCODE-2010-title16/pdf/USCODE-2010-title16-chap53-sec3371.pdf)打击“非法”野生动物、鱼类和植物的贩运。这项法律禁止跨州运输非法捕获或被禁止的动物，并解决了引入非本土动物物种带来的潜在问题。关于食品商品，寻求从欧盟进口鱼类/水产养殖产品和活/生贝类的人需要咨询美国商务部的国家海洋和大气管理局海鲜检验项目(见http://www.seafood.nmfs.noaa.gov/)．

4.动物福利考虑

4.1一般考虑

涉及活体动物(包括鱼类)的研究必须基于能够得出科学有效结果的实验设计和动物护理实践。鱼类对压力非常敏感(例如，Barton和Iwama 1991)，反应可能包括行为变化(例如，Martins等，2012)，生长减少，渗透状态改变，免疫系统抑制(随之而来的疾病发作)和生殖能力改变(Iwama et al. 2006;Schreck et al. 2001;Schreck 2010)。因此，除非实验目标要求测试应激反应的行为或条件，否则鱼类应在不会产生应激反应的条件下饲养、处理和测试。《准则》涉及科学研究的开展，并侧重于既定事实和发展知识的过程。提交给IACUCs的研究计划除了研究目标、目的和程序的细节外，还应考虑到动物护理方面的考虑。IACUCs将个人关于动物福利的价值观纳入其机构准则的程度由每个机构内部决定。

4.2压力

对压力的研究主要集中在动物如何进化出生理和行为机制来应对不断变化的环境条件的挑战，然后使它们保持体内平衡或自我维持的平衡。最适合每个物种福祉的一组环境变量(条件)通常包含每个因素和物种的特定范围(见5.7节临时收容和维护设施)，因为压力响应是特定于物种的(Schreck 2010)。因此，当鱼类被维持在这些范围内时，一种稳态平衡的状态是被期望的。体内平衡的偏离是应激反应的特征。虽然已经提出了许多关于压力的定义，但我们采用Schreck(2000)和Schreck et al.(2001)的定义:“当有机体在面对侮辱时试图抵抗死亡或重建稳态规范时发生的生理级联事件。”当受到压力时，鱼类通常会试图通过一个被称为“异稳态调节”的过程来重新建立内稳态，在这个过程中，它们调整自己的生理功能来重新建立动态平衡(Sterling and Eyer 1988)。虽然异稳态通常具有适应性，因为它有助于动物在面对短期压力时存活，但从长期来看，它可能会出现适应不良，并对生长、繁殖和免疫健康产生负面影响(Schreck 2010)。因此，研究人员需要了解那些可能导致实验动物压力的因素，潜在的后果，以及如何通过优化实验条件来避免压力。

每个调查人员和IACUC都应该了解将相关物种的压力降至最低的条件。然而，必须避免在类群之间进行外推，因为物种之间存在差异(Schreck 2010)。适合鱼类的因素和条件范围通常与用于哺乳动物的因素和条件范围有很大的差异。基于哺乳动物，特别是灵长类动物的经验的假设和看法绝不能外推到鱼类;然而，调查人员应该了解APHIS政策(即，政策11,USDA 2011，http://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/policy.php?policy=11)．

4.2.1应激阶段

鱼在检测到威胁后会产生应激反应。认识和理解压力的三个阶段是很重要的。在动物护理协议的设计中，每一项都值得考虑:

主要应激反应因物种而异，但其特征是立即的神经内分泌反应，包括儿茶酚胺和皮质类固醇的释放，可以通过测量血液激素来量化。有时行为变化伴随着这些内分泌反应，帮助动物应对压力源，本身对健康没有什么影响。
应激反应的次级阶段的特征是由初级反应引起的血液和组织功能的变化。继发性应激通常发生在最初反应的几分钟内，其特征是血糖和心率升高、利尿、白细胞计数改变、渗透压平衡改变和行为改变(见章节)6搬运和运输)．虽然这些反应会有短期的积极影响，但也有很多是负面的，所以应该尽可能避免。可以通过对抽取血液的研究来评估(见5.9节血液和其他组织的采集)。
第三次应激反应与长期暴露有关，并对生物体的健康产生负面影响。与第三次压力相关的影响包括生长下降、疾病倾向和生殖功能下降(Selye 1976;Schreck et al. 2001;Iwama et al. 2006;见第8节野外适应和7.3适应实验室条件)．避免第三次应激反应的最好方法是照顾动物，以最大限度地减少应激反应。

4.2.2测量和避免应力

虽然压力的本质是潜伏的，但它也往往是多态的，随着时间的推移而变化，在不同的物种生命的不同阶段以不同的形式出现。通过测量血液激素的变化来评估主要或次要压力几乎是不可行的;因此，建议研究人员设计避免压力的实验，除非研究目的需要测量压力指标。缺乏压力的重要指标是持续的正常行为活动和进食和生长的倾向。仔细的实验设计和计划可以确保研究结果不会被未识别或未测量的压力所混淆。除非研究的目的是建立圈养特定鱼类的最佳条件，例如濒危物种的圈养繁殖，否则研究人员通常建议选择已知最佳圈养条件并可在实验室中重现的鱼类进行实验。需要考虑的具体因素包括:(1)物种的选择，(2)被研究动物的历史，(3)水的化学性质，(4)水流，(5)水温，(6)光照条件和周期，(7)底层基质，(8)噪音和其他物理刺激，(9)庇护所，(10)饲养密度，以及(11)相对于体型和活动率的水箱大小。其他变量，如鱼类密度或水箱盖的存在与否，可能是重要的。被称为可靠的实验室模型的物种(如斑马鱼或日本Medaka)或通常用于鱼类养殖的物种(如海峡鲶鱼)Ictalurus蜥或虹鳟鱼雄鱼mykiss)，只要这种选择与研究目标相一致，就可以选择。

除了上述与长期维护有关的因素外，在处理鱼类或进行各种实验操作时还需要考虑其他因素。

应尽量减少处理。仅仅是用网捕鱼，就能在一分钟内诱导皮质醇等压力荷尔蒙的释放。在实验中使用鱼之前，应给鱼时间从处理中恢复。所需的恢复时间可能因物种和条件而异;因此，初步测试将有助于确定适当的恢复期。
压力源的影响可以通过使用镇静剂或在保持水中添加环境盐来减少渗透和相关压力。(请注意，由于海洋鱼类的渗透调节要求，它们可能是一个例外。)具体的盐和浓度将根据每种鱼类和环境条件而有所不同。然而，镇静剂本身可引起生理应激反应(Trushenski et al. 2012a)，因此应谨慎使用，并按照既定指南使用。
鱼类起源或饲养的环境条件不应迅速改变。在温度条件下尤其如此。水温2℃的瞬时变化一般不会致命，但会引起可检测到的应激反应。可容忍的变化取决于物种、生活史阶段、以前的热历史和初始保持条件。治疗后一个月可检测到既往热史引起的影响。还应避免水质发生迅速、实质性的变化(见第2节)7水质)．
鱼类密度应适当。生活在浅滩的鱼应该成群饲养，但不要太大的群体，使它们变得拥挤，争夺食物和空间，或降低水质。
如果与研究设计相一致，应允许有相当长的时间从干扰中恢复。至少1周的恢复是最好的，24小时应该被认为是最低的，即使恢复时间还不完全知道。尽管生理反应可能会更快地恢复到预应力条件，但鱼可能对随后的干扰异常敏感，持续时间更长。恢复正常的进食和鱼群活动通常是一个很好的恢复措施。

正如有经验的鱼类养殖者和调查人员所了解的那样，成功饲养圈养鱼类的关键原则是“了解你的鱼”。建议没有经验的调查人员与有经验的人员密切合作，直到他们有足够的经验来了解他们的鱼的正常情况。读者可以从一些评论中获得关于鱼类应激和应激反应的额外信息(Bonga 1997;巴顿2000)。

4.3痛觉和疼痛

从根本上说，疼痛是有意识思维的一种心理状态。疼痛的定义是由国际疼痛研究协会(IASP，http://www.iasp-pain.org/)已被科学界和医学界广泛接受。疼痛被IASP定义和描述为(1)“与实际或潜在的组织损伤相关的不愉快的感官和情感体验，或以这种组织损伤来描述，”(2)“…总是主观的，”和(3)“…有时报告为没有组织损伤”(IASP 2011，http://www.iasp-pain.org/Education/Content.aspx?ItemNumber=1698&navItemNumber=576#Pain)．这个科学组织解释说，疼痛的定义必须避免将其与外部诱发刺激联系起来(Wall 1999;IASP 2011)。当这个定义应用于无法客观地辨别意识心灵的心理体验的动物时，就出现了科学上的困难。科学家试图确定鱼是否感到疼痛，因此开发了替代指标，迄今为止，有缺点。总的来说，所研究鱼类的证据权重表明，哺乳动物的疼痛体验在鱼类中是没有的。

为了更好地理解水生动物生理学福利相关方面的研究文章的科学价值，最近阐明了一些偏见和局限性(Rose 2007;Browman和Skiftesvik 2011;Rose et al. 2014)。在包括鱼类在内的动物中进行疼痛研究的许多困惑都是由于未能将痛觉与如果疼痛发生就必须存在的心理事件区分开来(Vierck 2006;罗斯和伍德伯里2008)。在研究的鱼类物种中，哺乳动物缺乏调节疼痛和/或意识的大脑结构，并且痛觉感受器类型也存在缺陷(Rose et al. 2014)。

“痛觉”一词指的是神经系统的外周、脊髓和皮层下水平无意识地检测潜在的伤害性刺激。痛觉是对有害刺激进行编码的神经过程，其反应可能是自主的或行为的(IASP 2011)。虽然痛觉反应通常(但不总是)先于人类的疼痛，但它们必须在有意识的大脑的特定区域转化为心理体验，才能被归类为疼痛并被感觉到。然而，痛觉是脊椎动物的常见特征，但不是普遍特征。例如，所研究的板鳃科物种似乎缺乏伤害感知能力(Coggeshall等，1978;Snow et al. 1993)。

自从2004年指南(研究委员会2004年鱼类的使用)出版以来，主要由Sneddon和同事进行的一些研究表明，虹鳟鱼的疼痛体验得到了证明雄鱼mykiss(例如，Sneddon 2003;Sneddon et al. 2003a, 2003b;赖利等，2008;由Braithwaite 2010总结)。他们得出结论的主要依据是观察到鱼的摄食和通气速率的变化，以及麻醉后的“异常行为”，并向鳟鱼的颌部注射大量稀醋酸或蜂毒。这些实验诱导的行为受到了挑战(Rose 2003,2007, Rose et al. 2014)，并且没有被其他研究人员复制(Harms et al. 2005;Newby和Stevens 2008年)或与其他鱼类进行了测试(Reilly等，2008年)。研究依赖于避免或逃避有害刺激的终点作为疼痛的指标(Dunlop et al. 2006;Millsopp和Laming 2008)也可能不准确，因为这些行为终点不需要意识(见Rose 2007和Rose et al. 2014)。

几项关于硬骨鱼痛觉的研究表明硬骨鱼和哺乳动物在痛觉方面存在一些差异。解剖学和生理学研究报告了虹鳟鱼(Sneddon et al. 2003b)和尼罗罗非鱼的三叉神经中存在A-delta和C纤维痛觉感受器传入Oreochromis niloticus尾部神经(Roques et al. 2010)。A-delta纤维是痛觉传入神经的一种类型，负责触发人类快速感知的、定位良好的“第一疼痛”，而C纤维是哺乳动物体感神经纤维中最丰富的类型，负责人类经历的更令人厌恶的、持续的、燃烧的“第二疼痛”。虽然这些研究表明a -delta型纤维相当多，但在虹鳟鱼的三叉神经(Sneddon et al. 2003b)和尼罗罗非鱼的尾神经(Roques et al. 2010)中只发现了少量的C型纤维。对这两个物种的解剖观察使得Braithwaite(2010)声称支持硬骨鱼疼痛的合理性，然而C纤维的罕见出现禁忌表明疼痛诱导痛苦的可行性，甚至是鱼的强烈、长时间的痛觉。对于弹性鳃类，特别是鲨鱼和鳐鱼，既没有发现A-delta纤维也没有发现C纤维(Coggeshall et al. 1978;伦纳德1985;Snow et al. 1993)。弹性支肌似乎也缺乏脊髓I层，这是痛觉传入连接突触的主要区域(Cameron et al. 1990)。

其他实验和现场描述研究已经禁止了一些鱼类的疼痛体验。立即恢复进食和明显的正常活动，或在手术后麻醉恢复几分钟内恢复(Narnaware等人，2000年;Narnaware和Peter 2001;Harms et al. 2005)。生物遥测研究已经记录了在发射器植入后正常行为的快速恢复，以及长期生存和正常行为(Wagner and Stevens 2000;纽比等，2007;Cooke et al. 2011)。关于捕获和释放角度的研究始终表明，在释放后立即恢复正常活动，或者最多在相对较短的释放时间内恢复正常活动。据报道，许多鱼在释放后几分钟内就被捕回(Schill等人，1986;Rose et al. 2014)。 There is little debate that exposure to noxious stimuli, regardless of it being experienced as pain or not, is stressful from a behavioral standpoint; therefore, exposures to noxious stimuli should be minimized. While firm in believing that research on live fishes is acceptable and essential, the UFR Committee recognizes the sometimes difficult task facing IACUCs that must develop institutional guidelines that are both functional for, and accepted by, their constituents.

必须保护实验程序的所有受试者免受潜在的生理或行为障碍和伤害，以使结果被接受为实验受试者的代表。控制和最小化生理压力和暴露于有害刺激可以减少伤害实验动物的可能性，并通过最小化压力和其他生理/行为偏差(例如一些观察者可能解释为疼痛的伤害性行为反应)的任何混淆效应来提高数据质量。对鱼类福利有害的因素已经通过有效、客观的生理和行为健康指标很好地描述出来。科学文献应为IACUC制定有关水生动物福利的具体政策、建议或法规提供参考。

无论个别研究人员及其IACUCs对“疼痛”所接受的结论如何，都要强调谨慎处理程序的重要性，包括镇静或麻醉。使用镇静剂或麻醉药抑制鱼类对防止对动物的伤害通常是必要的，特别是在涉及侵入性手术的情况下(见7.12外科手术)。从研究者的安全角度来看，镇静或麻醉也很重要，特别是在处理大型或其他危险的受试者时。指南中描述的程序提供了额外的信息(见第7.11对鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质)．

5.场活动

5.1生境和人口考虑

无论是为了调查而活体采集鱼类，还是为了在博物馆中进行研究而保存，还是为了获得渔业管理所需的数据而加工，调查人员都应遵守并向学生和员工传授严格的栖息地保护伦理，以及在取样、处理和安乐死过程中尊重和人道地对待动物(ASIH等人，1988,1988;BOB国际体育兽医2013)。采集的方式应尽量减少对栖息地的干扰和“过度”死亡率。UFR委员会认识到，目前没有现场收集技术可以在被采样人群中造成零死亡率事件。研究目标通常会规定适当的抽样方法。给定一套可供选择的采样方法和收集装置，调查人员可以选择对目标和非目标鱼类种群造成最低程度的栖息地干扰和死亡率的方法。除非需要满足研究目标，否则应避免从育种集合体中收集大量动物。还应避免使用对生境造成不必要损害的收集技术，或尽量减少使用，以达到研究或采样目标。例如，拖网或其他形式的拖曳设备对于记录鱼类多样性或监测鱼类种群的健康状况至关重要;然而，这种齿轮会对基质、大型植物或鱼类栖息地的其他重要结构要素造成广泛的干扰。 Sampling equipment and strategies can be designed to minimize incidental capture of non-target species. Collecting gears, such as gill nets deployed for nonlethal sampling, should be checked frequently to avoid unnecessary mortality. Regardless of the purpose of the experiment—whether to manipulate abundance or to study behavior, reproductive potential, or survivability—mortalities within the population and disturbance to habitat should be kept to the minimum amount that the investigator (along with the IACUC) determines to be acceptable.

读者应该注意，第5节中的一些内容并不局限于实地活动，也可以扩展到实验室情况。

5.2字段收集

5.2.1许可

鱼类研究经常需要从野外捕获野生标本，无论是用于野外研究(如数据记录、标记和重新定位)，还是用于活标本或保存标本的实验室研究。除在公海(不属于任何特定国家管辖的水域)收集外，为所有研究目的收集鱼类都需要科学收集许可证。许可证由美国和加拿大的州、省、联邦和部落实体的自然资源机构颁发(见3.4许可证和证书)。许可证申请一般要求提供有关拟进行的研究、取样方法、取样区域，以及拟收集鱼类标本的数目和处置的资料。有关美国各州许可机构的清单，以及其他有关鱼类采集的有用信息，请参见Walsh and Meador(1998)。在联邦土地上采集鱼类通常需要从负责管理土地的机构获得单独的特殊使用许可证。签发采集许可证的地方、州、联邦和部落当局通常要求采集者通知他们具体的地点、日期和建议的采样方法。联邦人员在私人土地上采集鱼类需要获得土地所有者的许可。

5.2.2自然历史藏品

5.2.3代表性样本

一般来说，所探讨的问题和研究设计本身决定了调查所需的标本数量。获取用于研究的鱼类通常涉及在一个地点捕获人口或社区的很小一部分。在对鱼类进行抽样时所采用的一般原则是采取可靠地满足假设所需的最少的动物(见第2.3节统计设计)。为提供可靠的统计结果所必需的最低鱼类数量应通知抽样方案。根据齿轮和方法以及所需搬运量的不同，可能会导致较高的死亡率。在涉及鱼卵和早期生命阶段的调查中尤其如此。然而，幼鱼的高死亡率和从种群减少中迅速恢复都是许多鱼类生活史中的特征事件。

仅使用目测抽样并不总是充分的。在结构和生物复杂的栖息地，鱼类生物多样性数据是保护和管理鱼类的必要条件。例如，珊瑚礁栖息地的小型隐蔽鱼类最好使用杀鱼剂进行小规模采样;使用杀鱼剂后，视觉检测到的鱼的收集百分比增加(Smith-Vaniz等，2006年;Ackerman和Bellwod(2000)。最常用的杀鱼剂是鱼藤酮(见节)8.1安乐死)，是一种天然存在的酮，从原产于东南亚和南美洲的豆科植物中提取。这种化学选择的使用是多种多样的(McClay 2000);它的使用已经表明了外来物种的威胁(Rayner和Creese 2006)。Robertson和Smith-Vaniz(2008)回顾了当地自给自足的渔民和渔业管理者使用的鱼藤酮，以及它的毒性和对其他生物的影响。鱼藤酮通过阻断细胞对氧气的吸收来麻醉和杀死鱼类(Singer and Ramsay 1994)。手册及标准作业程序(http://BOB国际体育www.aka-wood.com/shop/55061p详细说明了鱼藤酮的正确使用(Finlayson et al. 2000;Finlayson et al. 2010)，并为渔业生物学家和公共机构提供了许多培训课程。Finlayson等人(2010)建议谨慎使用鱼藤酮作为最后的手段，因为它可能对意想不到的目标造成伤害。对替代方法的调查(mark 2011)是谨慎的，分类学专业知识的可用性也是谨慎的(Walsh和Meador 1998)，以确认存在的物种(见章节)8.1安乐死)．

在污染物研究中对鱼类进行采样通常是水生生态系统生物监测所固有的，因为鱼类有能力积累环境污染物并对其作出生理反应。化学污染物鱼类取样的现场程序(Hughes等，2006;Schmitt et al. 1999)是有用的，根据研究终点选择方案。美国地质调查局环境状况与趋势生物监测(BEST)计划(http://pubs.er.usgs.gov/publication/itr19990007)及国家污染物生物监测计划(http://www.cerc.usgs.gov/data/ncbp/ncbp.html．

5.2.4濒危物种的收集

“濒危物种”一词不仅适用于被州或联邦机构正式列为受威胁或濒危的物种，也适用于已被确定为候选物种的物种。1969年至1989年间，美国南部濒危、受威胁和脆弱鱼类的数量增加了125% (Warren et al. 2000)。调查人员需要了解所取样的水生栖息地是否支持濒危物种，以及如何在野外识别这些物种(Warren and Burr 1994)。调查人员还可以确定支持濒危物种和非濒危物种的栖息地是否被认为是保护关注的区域，以及物种是否可以成为保护关注的焦点(Jenkins et al. 2011)。国家野生动物行动计划(鱼类和野生动物机构协会2007年，http://www.teaming.com/state-wildlife-action-plans-swaps)和美国自然遗产计划网络(http://www.natureserve.org/natureserve-network)保存须保育的鱼类(及其他动植物物种)名单。国家保护物种的名单可以从颁发采集许可证的办公室和自然保护区的网站上获得(最初被称为生物多样性信息协会，http://www.natureserve.org/visitLocal/index.jsp)和USFWS。美国鱼类及野生动物管理局濒危物种计划(http://www.fws.gov/endangered/)保存联邦保护物种的名单。国家海洋和大气管理局(NOAA，美国国家海洋和大气管理局)的网站上也可搜索到受联邦威胁和濒危鱼类的名单。http://www.noaa.gov/)渔BOB国际体育业事务处(http://www.nmfs.noaa.gov/)受保护资源局(http://www.nmfs.noaa.gov/pr/)网站或自然保护中心(http://www.natureserve.org/)．有关受保护海洋或溯河鱼类的简报(http://www.nmfs.noaa.gov/pr/species/fish/)也可从美国国家海洋和大气管理局渔业局获得。BOB国际体育加拿大、墨西哥和其他国家的受保护鱼类名单可以在各自的国家网站上在线查看(如濒危物种法案公共登记处、http://www.sararegistry.gc.ca/default_e.cfm)，以及通过美国鱼类及野生动物局濒危物种计划网站(http://ecos.fws.gov/tess_public/SpeciesReport.do?lead=10&listingType=L)．国际自然与自然资源保护联盟(IUCN)维护着IUCN濒危物种红色名录^TM，版本2013.1 (http://www.iucnredlist.org/)，提供全球淡水鱼类、海鱼以及其他动植物的保育状况。

只有在特殊情况下(例如，进行保护状况调查)才允许采集濒危物种，并需要特别许可证。只能使用非侵入性处理技术(不会对动物造成任何伤害的处理)。例如，可以包括血液和milt收集，以及某些鳍剪辑和标记方法。如果研究的目标是收集濒危物种进行活体研究，或者如果预期偶然捕获是副捕获，则应避免任何可能有害(例如，没有密切监测的刺网捕获)或致命(例如，杀鱼剂)的收集方法。

濒危鱼类的保护工作经常涉及迁移，要么是在自然地点之间，要么是从自然界到繁殖设施，然后再回到自然界。管理濒危鱼类迁移的环境法是复杂的，其依据是资源利用、移植地点的适宜性和安全性，以及在不同地点之间移植个体的适宜性(即，数量足够或没有疾病;Minckley 1995)。所有迁移工作必须由对有关物种和地区有权威和责任的机构进行，未经授权的个人不得尝试。

5.2.5博物馆标本和其他保存标本

从自然种群中收集用于博物馆保存的鱼类对于(1)了解基本生物学和生活史，(2)记录和记录生物多样性，以及(3)建立了解进化关系和环境影响所必需的参考收藏至关重要(ASIH等人，1987,1988)。生态系统变异的研究或新物种的描述经常需要从地理范围内的多个种群中收集相对较大的序列(足以计算计数和测量的统计数据)(Hughes和McCormick 2006)。为这些目的对自然鱼类种群进行抽样，通常涉及广泛的调查和按其在自然种群中出现的比例收集标本;此外，这种抽样可能不是假设驱动的。分子系统学的研究通常涉及非常少量的标本，或从研究鱼类中取出的少量组织。然而，在这些研究中，与一般生态调查中一样重要的是，在自然历史博物馆中保存代金券标本，在那里，样品被冷冻或保存在诸如95%酒精(异丙醇)或70%乙醇等固定剂中，以供将来参考(Wheeler 2003年)。博物馆收藏的鱼类也可用于其他类型的研究。在为博物馆收藏鱼类时，应遵循两个重要原则:(1)所收集的标本数量应是完成研究目标所需的最低数量，(2)所收集的动物应服务于各种研究。每一次收集都应附有包含具体实地数据(如日期、确切位置、生境类型等)的精确标记。

为博物馆保存而收集的标本的保存方式应最大限度地发挥其研究效用，并尽量减少额外收集的需要。福尔马林固定是用于确保鱼类标本长期保存质量的标准做法。档案保存的首选方法是直接浸泡在10%福尔马林(3.7%甲醛)溶液中，然后转移到酒精(70%乙醇，首选未变性)中长期保存和存储，就像凭证标本一样。化学物质通常被添加到福尔马林中以缓冲溶液或保持颜色(例如，离子醇)(Fink et al. 1979)。虽然福尔马林是脊椎动物组织的首选固定剂，但其他固定剂有时也用于专门的研究目的，如组织学(布因液或吉尔森液)和电子显微镜(戊二醛)(Luna 1992,1992;Presnell等，1997;克拉克1981)。这些方法的固定通常包括从标本中解剖出的小块组织，这些组织可以通过浸入福尔马林以外的方式牺牲。长期存档作为凭证标本的尸体应在福尔马林中固定，然后转移到酒精中。在将鱼浸泡在福尔马林中之前，应该实施安乐死，前提是镇静剂不会对研究目标造成不利影响。 A variety of chemicals, such as tricaine methanesulfonate (MS-222), may be used to anesthetize or euthanize fishes (see section 7.11 Restraint of Fishes: Sedatives and Related Chemicals). When study interests demand that specimens be fixed without prior treatment with sedatives, the specimens can be numbed in ice water, or for small fishes, immersed directly in liquid nitrogen (see section 8.1 Euthanasia).

部分动物标本，包括精子、卵子、胚胎、组织和血清，有时是组织库。例如，国家动物种质资源计划(http://nrrc.ars.usda.gov/A-GRIN/main_webpage/ars?record_source=US)获取和保存遗传资源，以确保生物多样性，用于种群重建或基因组研究。圣地亚哥动物园保育研究所(http://www.sandiegozooglobal.org/ICR/purpose)以多种技术利用储存的遗传资源。在全球范围内，包括环境监测、遗传学研究和系统学在内的大量调查中，都会出现用于回顾性分析的标本库的各种迭代。鱼类组织(肝脏和肌肉)已被美国国家标准与技术研究所(NIST)收集，用于长期储存各种环境标本。http://www.nist.gov/index.html)通过国家生物监测标本库(Wise and Koster 1995;Becker and Wise 2006)。

5.3现场捕获技术和设备

取样方法的选择应根据工作人员的安全、研究目标、季节因素和取样的栖息地类型来决定。捕捉技术应防止或减少伤害和压力(见4.2节压力)(McMichael et al. 1998;Henry and Grizzle 2003;Henry et al. 2003)。如果鱼类的饲养时间超过了收集基本指标所需的时间，则应提供活井或活槽。应注意避免意外捕获非目标物种，并确保偶然捕获的个体以最小或没有伤害的方式释放(ASIH等人，1987,1988)。由于物种的大小或物种特征的行为或能力，可能对工人造成危险的物种需要额外的预防措施(见章节)5.5危险物种和标本而且7.10圈养的危险物种和标本)．

一些研究表明，电捕鱼是获取淡水栖息地鱼类组合数据的最有效技术之一(Yoder和Smith, 1998年)。电钓可以用涉水法或装船法进行。适当的电捕鱼方案应考虑取样目的和环境的物理约束(例如，电导率、水深和障碍物的存在)，以及尽可能减少电捕鱼伤鱼可能性的设备和技术的使用(Snyder 2003;Dean and Temple 2011)。其他取样方法，如围网、鳃网或钩网、拖网、抛网、升降网或推网、刚性陷阱(如小鱼陷阱、板条陷阱)、箍网、fyke网、堰或垂钓，如果操作不当，也可能对鱼类造成同样的伤害。所选择的采样方法应能够有效捕获实现研究目标所需的鱼类种类和大小，同时最大限度地减少所收集的鱼类和非目标生物的伤害和死亡率。如果要收集大范围的鱼类大小或种类，或者覆盖不同的栖息地，可能需要多个采样装置。被动捕获方法，如设置网和陷阱，应经常检查，以防止目标和非目标物种不必要的死亡。渔网和捕鲸器应小心放置、固定、悬挂旗帜，然后在停止取样时移走，以避免“幽灵捕鱼”(丢失或遗弃的渔具继续杀死鱼类和其他海洋生物)。Bonar et al.(2009)和Zale et al.(2013)提供了关于淡水环境中鱼类的标准采样方法以及各种采集装置的效率和特异性的额外信息。

5.4鱼类的场约束:镇静剂

应避免造成生理压力的长时间克制。在某些情况下，使用镇静剂或麻醉剂来减少压力可能是可取的。虽然术语“麻醉”、“镇静”和“固定”在提到鱼时可以互换使用，但这些词有不同的定义，反映了不同的感官知觉和反应水平。Ross和Ross(2008)将麻醉定义为“一种可逆的、全身的感觉知觉丧失，并伴有药物或物理手段引起的类似睡眠的状态”，而镇静是“初级麻醉水平，对刺激的反应大大降低，达到了一些镇痛效果，但感觉能力通常完好无损，不发生平衡丧失。”“固定”一般是指防止运动，并不意味着任何关于感觉知觉敏锐度的状态。根据化学剂及其在鱼类中的作用方式，可以适用其中一个或多个术语。作为保守的方法，这里使用术语“镇静剂”，因为这个术语可能适用于大多数用于抑制和促进处理鱼类的药剂。

5.4.1批准用于鱼类的药物

AFS、AADAP计划和FDA兽医医学中心正在进行对话，以确保渔业专业人员能够获得关于使用鱼药的最新和准确的信息(Bowker和Trushenski 2013)。BOB国际体育FDA唯一批准用于鱼类现场镇静的物质是MS-222。该产品目前在美国上市，含有Tricaine-S™(Western Chemical, Inc.;身孕,华盛顿)。然而，MS-222在野外的使用是有限的，因为FDA要求食用鱼，包括可能被人类捕获和食用的野生鱼，在释放或屠宰供人类食用之前必须经过21天的戒断期(Anderson et al. 1997;Trushenski et al. 2012a, 2012b)。MS-222的使用进一步限制于ictalurids，鲑科鱼类，卵科鱼类和鲈科鱼类或其他实验室或孵化场饲养的鱼类，水温超过10°C。在处理干燥形式的化学品时，应使用个人防护设备，如呼吸口罩和手套。见Coyle等人2004年关于麻醉药在水生动物中的使用的南方区域水产养殖中心的情况说明3900https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/getFactSheet/whichfactsheet/162/．与许多治疗药物不同，这些镇静剂不能用于标签外的用途(即，用于其他分类群，或标签上没有写的治疗方案)。在“软水”中使用MS-222时，建议添加适当的缓冲化合物，如碳酸钠，以抵消其酸化效应，从而增加处理后的生存期(Smit et al. 1979)。

5.4.2低监管优先级(LRP)药物

虽然二氧化碳(CO₂)不是FDA批准的用于鱼类的药物，它被认为是LRP的药物，可以作为鱼类镇静剂，只要满足某些条件(FDA 2011;看到附录表1参阅LRP药物清单及使用注意事项)。更具体地说，如果CO的等级合适₂使用，遵循良好的管理实践，并满足当地环境要求，FDA已确定对CO₂作为鱼的镇定剂是不可能的。

5.4.3动物新药研究(INAD)

两种目前未获批准的药物，一种基于苯佐卡因的产品(苯佐克含有20%的苯佐卡因;由ACD Pharmaceuticals AS赞助，Ålesund, Norway)和一种基于丁香酚的产品(AQUI-S20E含有10%丁香酚;由AQUIS New Zealand Ltd赞助，Lower Hutt, New Zealand)可能在2015年获得FDA初步批准用于镇静鳍鱼，并可能在FDA授予并由USFWS持有的INAD豁免授权下用作镇静剂。目前，基于丁香酚的产品可以作为一种即时释放的镇静剂用于现场应用，在这些应用中，鱼一生中可能只会被镇静一次。所有其他申请都需要3天的提款期。AADAP研究计划(http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/research%20program%20-%20history.htm)负责USFWS INAD计划(http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/national.htm)，包括水产养殖药物使用的监管和研究。水产养殖药物的最新情况可通过INAD计划网站查阅。

在使用任何镇静剂时，都应对少量鱼类进行测试，以确定在允许范围内的适当剂量，并确保鱼类在可接受的恢复时间内恢复到正常的生理和行为状态。必须对动物进行观察，直到它们恢复正常为止(见节)4.2.2测量和避免应力)．使用过的镇静剂必须按照地方、州、部落、省和联邦法规进行处置5.7临时保管和维护设施而且7.11鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质)．

5.5危险物种和标本

被认为对人类有危险的物种通常是在野外环境中遇到的，但实验室环境的指导方针是类似的。处理危险物种的方式应该对研究人员和被处理动物都是安全的。调查人员应了解其机构关于使用危险或有毒动物的安全规定。这些条例可包括标准操作规程，限制只有获得授权的人员才能进入，具体规定防护服或处理装置的使用，并规定被动物伤害的人的治疗方法，包括急救和获得后续医疗护理的程序。特殊处理方法将取决于所处理的物种、对研究者的危险性质以及研究工作的性质。一般准则如下:

程序应尽量缩短处理时间，减少或消除处理人员与动物之间的接触。
调查人员不应单独工作。在任何时候都应该有另一名熟悉捕获和处理技术以及应急措施的人员在场。
为防止严重的继发感染，研究者应注意避免常见的咬伤、擦伤和擦伤、割伤和脊柱穿刺，所有这些都可能导致感染。
因不当处理海洋和淡水动物而造成的人体伤口应尽快清洗，以避免细菌感染(即人畜共患病)。任何出血都需要控制。
伤口应至少用一升最干净的消毒淡水冲洗。在没有无菌盐水或无菌水的情况下，可以使用自来水或瓶装饮用水，避免使用海水。
应用常规急救后，应寻求医疗援助，以防止并发症。

总的来说，查阅相关文献和对该物种有经验的同事是最重要的。关于一般和具体的信息，特别是关于海洋环境的信息，有几本书主要是为经常接触海洋动物的水肺潜水员、自由潜水员和浮潜者撰写的警惕性急救指南(Halstead 1995;坎宁安和戈茨1996;Auerback 1997)，以及潜水员警报网络(DAN)网站(www.diversalertnetwork.org)．

5.6搬运和运输

鱼在处理和运输时会表现出一定程度的应激反应。处理鱼类的方法因鱼类的种类、它们所处的环境以及特定地区或国家的传统和资源而异(Avault 1996)。然而，通过消除粗暴的操作、快速的温度变化、突然的水质变化、磨损和过紧的约束，可以减少应力响应。不恰当的处理和运输程序可导致血液谱的变化(Ellsaesser和Clem 1986)和大量的死亡率(Weirich 1997;Carmichael et al. 2001)。处理和运输程序的设计必须尽量减少应力的影响，从而减少即时和延迟的损失(见节)4.2压力)．

在处理和运输压力源时发生的一些生理变化是可测量的，可以监测的。这些变化包括心排血量增加、鳃血管增加、儿茶酚胺和皮质类固醇激素的释放(Carmichael et al. 1984a;Weirich 1997)。在野外或实验室处理鱼类的特点往往是易患被认为是由免疫抑制介导的疾病(Wedemeyer 1970年)。淋巴细胞减少、嗜中性粒细胞增多和淋巴细胞无反应性被认为是处理和运输压力的结果(Ellsaesser和Clem 1986)。一些物种的临床血液学值是可用的(Stoskopf 1993b)。根据压力源的严重程度和暴露时间，渗透调节功能障碍和免疫抑制可导致死亡。

为了减轻与处理和运输相关的压力，研究者可以减少压力源的数量和严重程度，尽量减少压力源的持续时间，并尽量减少代谢率的增加。收获技术和装运前处理对活鱼的成功装运至关重要(Dupree和Huner 1984)。预处理处理可包括添加镇静剂以降低代谢率，或向运输水中添加盐或钙以预防或减少渗透调节功能障碍和由此导致的离子失衡(Carmichael等，1984b)。饲料在运输前应保留1或2天(Weirich 1997)。一般来说，如果在凉爽的天气进行运输，对动物的伤害会小一些。应使用适当的运输设备。运输罐应构造良好，在使用前应消毒(Avault 1996年)。一辆活生生的拖运车能安全运输的鱼的重量取决于曝气系统的效率、拖运的持续时间、水温、鱼的大小和鱼的种类(Avault 1996)。在运输过程中保持可接受的溶解氧、二氧化碳、温度、氨和pH值范围是至关重要的。鱼类可通过湿式或干式转移方法在捕获和运输单位之间转移，或在运输单位和保存单位之间转移。 Wet transfer involves transport of fishes in a container of water and minimizes direct contact with nets. Wet transfer usually results in less stress than dry transfer, where the net is used alone. Ideally, fishes should be allowed to recover in the same or similar medium used for transport (Carmichael et al. 1984b; Weirich 1997). The length of time for recovery may vary depending upon conditions, the amount of handling, and research objectives, but 72 hours typically is considered a minimum following extensive handling (see section5.8野外适应)．

5.7临时保管和维护设施

由于每个水生物种的生物需求和个别项目的性质各不相同，因此只提供关于临时保存和维护的最一般性建议。为了找到最适合物种需求和研究目的的安置方法，可能需要测试和比较几种安置方法。饲养动物的容易程度虽然重要，但不应成为住房条件的主要决定因素;然而，这种便利通常可以确保更好地遵守既定的维护协议(ASIH等人，1987,1988)。

正常的野外维护设施应包括那些被认为对动物生存和福祉重要的自然栖息地方面。可以通过观察动物生长和体重、存活率、活动水平、一般行为和外观的变化来监测养护设施的充分性(Snieszko 1974)。应提供营养均衡的饮食，或尽量复制天然食品。应遵循自然光和温度条件，除非正在研究改变这些因素以达到预期效果(例如，产卵周期操纵)(ASIH等人，1988,1988)。鱼类具有最佳的热状态(Sylvester 1970)，免疫系统在此范围内功能最佳(Bly和Clem 1992)。疾病也会在温度窗口期间发生，例如爱德华菌属ictaluri《海峡鲶鱼》(Hawke 1979)。罐体清洗的频率应介于预防疾病所需的清洁水平和频繁处理所造成的压力之间(ash等人，1987年，1988年)。

对于养殖、饵料或运动鱼类来说，在装运前，鱼类通常被储存在大桶或水箱中。这种控制使生产者能够根据大小对鱼进行分级，并在必要时进行药物治疗。保持也使鱼适应处理和运输(Huner等人，1984年)。当从池塘中收获海峡鲶鱼时，工业中使用活车或装鱼的袋子(Huner et al. 1984;Green and Yant 2011)，并可与收获围网相结合，作为临时的储存容器和分级机。这些方法一般适用于所有池塘养殖的鱼种。在池塘的情况下，鱼可能会移动到更深的水，在这种情况下，使用循环泵或增氧机可能是有益的。

与其他围护系统一样，蓄水池需要考虑到饲养密度或鱼类生物量与可用水量的关系。必须考虑水的流入和周转率，因为良好的水质需要足够的水交换。进水中可用的氧气需要超过鱼缸中鱼类代谢消耗的氧气(Casebolt et al. 1998)。充分的曝气可以通过压缩空气、注入或瓶装氧气或搅拌来提供。如果符合研究目标，还可以使用镇静剂来减少鱼类的体力活动。应避免过多的噪音和振动，因为这些因素会使鱼类产生急性或慢性应激反应(Stoskopf 1992)(见7.4节鱼类长期饲养设施)。

如果发生极端天气和环境事件，可能需要采取应急准备措施，以便将来短期维护研究动物。例如，可能需要有多余的饲料储存、替代水供应和备用发电机。主动的机构和研究人员计划可能是实际的，甚至是IACUCs所需要的。

5.8野外适应

因为在处理和转移鱼类时，许多生理过程都可能被改变，使鱼类适应或适应新环境可以减少潜在的负面影响。如果临时储水设施(见第5.7节临时储水和维修设施)的供水的物理和化学性质与水源不同，应注意提供尽可能相似的水。例如，把鱼放在漂浮在水面上有氧气的塑料袋里，可以用来让捕获的鱼适应新的水温。如果差异较大，通常的做法是逐渐将运输单元的水替换为养殖单元的水源水，为鱼类的适应提供足够的时间。关于如何运输和驯化活暖水鱼类的有用注意事项，请参阅南方区域水产养殖中心暖水鱼类运输情况表，按物种划分的装载率和提示(Jensen 1990a，https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/getFactSheet/whichfactsheet/77/)，设备和指南(Wynne and Wurts 2011，https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/getFactSheet/whichfactsheet/74/)，以及程序和加载速率(Jensen 1990b，https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/getFactSheet/whichfactsheet/76/)，以及在中北部区域水产养殖中心的情况介绍中，袋装鱼的运输(Swann 1993，http://www.ncrac.org/oldfiles/NR/rdonlyres/237DFD95-2967-4455-A668-3CFA051036BE/0/ncrac104.pdf)．

5.9血液和其他组织的采集

从仔细收集和检查血液和其他组织中获得的结果通常对鱼类研究至关重要(Blaxhall 1972;本厂1992年)。在野外条件下，通常不可能为这些手术提供无菌条件，必须小心谨慎，防止对动物造成伤害和压力。可以在不影响鱼类生存的情况下，从鱼类身上获取血液和体液样本，即使是100克以下的小样本(Stoskopf 1993a)。建议使用含有少量抗凝剂的塑料注射器，如肝素钠或肝素铵或柠檬酸钠，以防止血液凝结。如果需要，研究目标将确定抗凝剂的类型、体积和浓度的正确选择。从鱼类身上采集血液的主要技术有三种:心脏穿刺、静脉穿刺和尾部出血(Blaxhall 1972;Stoskopf 1993a, b).尾巴是血液取样的首选部位。鱼的脊椎骨下的血管可以用侧面或腹部的方法取样。梭形鱼类有时从腹侧进行心脏穿刺，横向压缩的鱼类有时通过被盖进行心脏穿刺。 For repeated sampling, cannulae may be implanted in the dorsal aorta through the buccal cavity. Blood from the caudal vessels may be collected directly into collection tubes by cutting off the tails of sedated fish that will be euthanized following the procedure. However, extraneous fluids and proteins that may influence cell quality often co-occur with this procedure. Caution must be exercised to ensure that the method of sedation will not interfere with subsequent analyses. Additional information on sampling methods for the collection of blood from fishes has been described by Klontz and Smith (1968), Smith et al. (1999), and Marino et al. (2001).

其他可用于收集的组织包括耳石、鳃、肾脏、甲状腺、脾脏、睾丸、卵巢、肝脏、心脏、大脑和肌肉。内部组织的收集通常需要牺牲实验动物，并且必须在适当的麻醉或安乐死之前进行8.1安乐死)．这些组织也可用于污染物分析等目的(见节)5.2.3代表性样本)，或进行活组织检查或尸体解剖。组织可用新鲜或冷冻，或置于固定或保存介质中，如缓冲福尔马林、乙醇或甲醇，然后进行组织学处理(Luna 1992;Presnell et al. 1997)。一些研究的目的可能是收集鳞片、刺或小片鱼鳍，这可以在对活鱼影响最小的情况下完成，可以被认为是非侵入性采样。当研究濒危物种和小种群时，这一点很重要5.2.4濒危物种的收集)．

当运输活组织时，介质必须具有适当的离子和渗透浓度，并且可以包含糖作为能量来源。有经验的研究人员发现汉克的平衡盐溶液(Jenkins et al. 2013)、厄尔的平衡盐溶液或Holtfreter的溶液是有效的运输介质(Holtfreter 1931)。可包括非细胞毒性抗生素或抗真菌药物，以防止细菌和真菌生物的生长(Jenkins 2011a;Jenkins et al. 2013)。某些细胞和核酸稳定剂可以使遥远地点的鱼类取样成为可能，以便以后在实验室进行组织分析(Olivier和Jenkins，出版中)。

6.标记和标签

6.1总体原则

人们对标记动物进行了研究，以获得它们的行为、种群动态和生态方面的信息，所有这些信息对于制定保护和管理策略都是必不可少的。在研究年龄和生长、死亡率(包括自然和捕捞引起的死亡率)、丰度、垂钓者捕获或收获率、栖息地利用和移动/迁移、种群识别或放养成功等方面，通常需要使用天然或人工标签或标记来识别鱼类(Pine等人，2012年)。研究人员可以使用内在和外在识别系统，允许研究的性质决定所使用的标签或标记的类型。综合使用多种标签或标记技术有助于确保鱼类的识别，并有助于估计标签丢失率。

在研究目标的背景下，选择特定类型的标签或标记的基本考虑因素包括对动物生存、行为和生长的潜在影响;标签永久性和识别性;动物的数量和大小;捕获、处理和标记的压力;总成本;回收有标记的鱼类;以及任何机构、州、省或国家之间所需的协调(Pine等人，2012)。研究人员还应确定该动物是否会面临比正常情况下更大的被捕食风险，其作为配偶的可取性是否会降低，感染风险是否会大幅增加，以及其他潜在影响(ASIH et al. 1987,1988)。由于标记和标记鱼类的技术已被广泛审查，并不断发展，文献综述应告知研究人员(McFarlane et al. 1990;帕克等人，1990; Nielsen 1992; Hammerschlag et al. 2011; Wagner et al. 2011; McKenzie et al. 2012; Pine et al. 2012).

标记对鱼的影响取决于鱼在放生时的身体状况。损伤的发生是物种和大小特定的，较小的鱼类可能更容易受到伤害。大多数标记和标记程序造成的小伤口通常不需要抗生素治疗即可愈合。所有镇静药或抗生素的使用必须符合法规要求。

6.2外部标签和标志

外部标签和标记的使用已经发展了很长一段时间(McFarlane et al. 1990)。天然标记和人工标记或标记在渔业研究中都是常用的，每种类型都具有不同的功能和局限性。BOB国际体育自然的外部标记包括分生特征、色素沉着、形态测量和鳞片特征，但自然标记受环境和遗传影响。鱼鳞的形状和大小，以及圆形间距，是经常使用的。要有效地利用自然标记，就必须充分了解鱼类的生活史。

在鱼类身上产生人工外部标记的方法有多种。鳍或其他身体部位的改变，在实践中超过100年，可以通过剪裁或穿孔来完成。选择剪切或去除鳍取决于所研究的物种;例如，剪断雄鱼的肛鳍是不合适的，因为它的功能是交配器官，而切除鲑鱼的脂肪鳍的影响可以忽略不计(ASIH等人，1988,1988)(见节)5.2.4濒危物种的收集)．热标记或冷标记，即将设备(如液氮标记)贴在身体上数秒进行标记的过程，在特定情况下可能是一种有效的标记技术，并且不会对底层鱼类组织造成实质性伤害(Bryant等，1990年)。鱼在打烙印前应麻醉。用于标记鱼类的外部着色剂包括染料、污渍、墨水、油漆、液体乳胶、可见植入弹性体和通过浸泡、喷涂、注射或纹身管理的塑料。需要注意区分相似色调的外部着色剂标记(Curtis 2006)。

外部标签因其颜色、形状、大小或附着位置而引人注目，并由各种材料组成。外部标签上的打印可以传递重要数据，如个体鱼的识别码、捕获和标签返回的奖励值以及研究者的联系信息。为水轮机通道生存研究而设计的一个外部发射机，被塑造成鱼已经显示出实用性(邓等人，2012;Brown et al. 2013)。通常应用于鱼类的外部标签包括dart和t-bar锚标签、圆盘标签、Carlin标签和意大利面或环标签(Guy et al. 1996)。Dart和anchor标签是最常用的外部标签(Nielsen 1992)，但据报道，在一些物种中有很高的损失率(Guy et al. 1996)。适当的插入技术和使用相对于鱼类大小的小标签可以减少鱼类受伤和标签丢失的可能性(Guy et al. 1996)。

6.3内部标签和标记，以及生物遥测

植入编码线标签、无线电和声学遥测发射器、档案生物学家、被动集成应答器(PIT)标签、可见植入alpha数字标签、耳石标记和天然寄生虫是用于识别鱼类的内部标记系统(Prentice等人，1990年;Brown et al. 2011)。编码线标签识别系统的使用已在多个属鱼类(Buckley和Blankenship 1990年)包括幼鲑(Liedtke等人2012年)的管理和研究应用中进行了测试，未发生不良组织反应。编码的电线标签通常被注射到软骨、结缔组织或肌肉中，随后用手持设备进行电子检测。

PIT标签由一个小型计算机芯片和天线组成，天线被包裹在一个玻璃管中，注射到鱼的肌肉组织或腹膜腔中。每个PIT标签携带一个唯一的代码，当标签在范围内时，该代码将被中继到手持或固定式阅读设备。PIT标签的优点包括长寿命和通常高保留率(Freeland 1995;Guy et al. 1996);然而，标记在体内的位置和鱼的长度会影响保留率(Guy et al. 1996;粗鲁等人，2011)。PIT标签数据可通过软、硬鱼组织读取;在海水和淡水中;通过玻璃、塑料和金属容器;当鱼以一定速度移动时。 Above certain fish size thresholds (Tatara 2009), they have little or no effect on fish growth, survival, or behavior (Prentice et al. 1990). Various tags and methods are available for the PIT tagging procedures; information can be found at state websites (e.g., Idaho and Arizona) and at manufacturer websites.

可见植入标签是字母数字编码和聚酯薄膜制成。它们被皮下插入透明组织，以便在外部保持可见(Haw et al. 1990)。常见的标记位置包括眼睛后部的透明组织，在下颌，或在鳍膜。标签保留因物种、标签在体内的位置和鱼的大小而异;非常小的鱼可能没有足够的透明组织来容纳标签的大小(Griffiths 2002)。

控制环境温度、摄食速率、光周期、外部化学浴或标记饲料可以在鱼耳石中诱导特定的标记。在受控条件下繁殖的鱼类是这种操作的理想选择。耳石微结构特征和诱导标记是永久性的，可以在任何年龄的鱼中观察和分析。四环素和其他荧光化合物(如钙黄素、茜素化合物)是鱼类钙化结构的著名标记物(Guy et al. 1996;Carty和Bowker 2013)，尽管这些应用是由FDA监管的药物治疗(见章节5.4.1批准用于鱼类的药物)．鱼的大小、化合物的用量和摄取方法以及水的化学性质都会影响荧光化合物的标记效果(Beckman等，1990;Rutherford et al. 2002)。在鱼类生长迅速时，标记成功率最高(Conover和Sheehan 1999)。耳石和其他钙化结构也可以用碱土和稀土元素(Behrens Yamada和Mulligan 1990)或同位素标记化合物(Munro et al. 2008;史密斯和惠特利奇2011)。注射含有特定化学元素或稳定同位素的化合物可用于“质量标记”后代的胚胎耳石(Thorrold et al. 2006)。BOB国际体育需要种群定义和评估早期生命阶段的种群成功或分散情况的渔业非常适合使用耳石标记技术。

鱼类寄生虫的几个分类群已被用作生物标记，这种方法最适合于分离相对独立的鱼类种群(MacKenzie 1983)。如果寄生虫与鱼的特定解剖部位相关联，则用作生物标记的内部寄生虫的回收率将得到提高。通过计算一种寄生虫在一种鱼类种群中发病率与另一种鱼类种群中发病率的比率，决定是否将一种寄生虫作为鱼类的自然标记(Wydoski和Emery 1983)。

水下生物遥测包括将生物信息通过超声波或无线电信号从鱼类传输到远程接收系统的装置(Cooke et al. 2012)。无线电传输仅适用于相对较浅的淡水(ASIH等，1987,1988)。标签或发射器以及附着或植入的方法和位置的选择应适合鱼类的种类和大小，并由受过培训的人员执行。在自由放养的鱼类中，外科手术将递质植入体腔是很常见的。使用最小和最轻的发射器，提供所需的信号类型、强度和电池寿命，将最大限度地减少标签丢失和发射器附件对鱼类生存、生长和行为的潜在影响。Wagner et al.(2011)和Mulcahy(2003,2013)回顾了在鱼类中植入递质的手术技术。已经开发了外部中性浮力发射器，用于水电设施中鲑鱼幼鱼的涡轮通道研究(Deng et al. 2012)。当鱼暴露在快速变化的压力下时，与手术植入的发射器相比，外部发射器可能会降低受伤或死亡的可能性(Brown et al. 2013)。在连接外部发射器后，应使用尽量减少皮肤刺激的技术(Crook 2004)(见章节)7.12外科手术)．

6.4遗传标记

利用基于染色体和核DNA多态性的标记的技术发展迅速，并在继续发展。在选择性育种项目中使用DNA标记，在评估储存物种的贡献和影响，以及在描述孵化场生产的鱼类的特定栖息地要求方面已经出现了好处(Purdom 1993)。为了管理自然种群，了解鱼类物种是作为一个单一的遗传单位存在还是作为相对不同的遗传群体存在是至关重要的(Beaumont和Hoare 2003)。即使在鲸类动物等范围广泛且难以接近的哺乳动物中，基因标记也很有效(Palsbøll等人，1997年)。“DNA条形码”在物种识别和准确标记海鲜产品方面非常有用(Handy等，2011年)。使用基因标记的另一个激励因素是，足够的组织样本可以以非致命性的方式获得(例如，剪鳍)，并且只需很少的处理。遗传标签是永久性的，存在于所有个体中，因此是传统标签的一个很好的替代品。

在开发用于区分鱼类种群的DNA技术之前，研究人员研究了同种异体酶——由同一位点或DNA序列上的不同等位基因编码的变异酶形式。这种类型的遗传分析有时需要牺牲鱼来获得适当的样本，而核型分析则需要检查分裂的细胞。小型实验鱼，如日本Medaka和斑马鱼被广泛用作脊椎动物发育遗传学研究和转基因研究的模型(Ozato和Wakamatsu 1994年)。DNA标记用于鱼类种群鉴定最初仅限于线粒体DNA的差异(Phillips and Ihssen 1990)。

DNA水平的遗传变异可以通过多种方式测量(Beaumont和Hoare 2003)。一些包括DNA长度和序列变化，DNA片段大小变化，如限制性片段长度多态性(RFLPs)，与线粒体DNA的限制性片段长度多态性(RFLPs)，可变数量串联重复序列(VNTR)(微卫星)，DNA指纹使用限制性内切酶，随机扩增多态性DNA (RAPD)，和扩增片段长度多态性(AFLP)。下一代测序技术可快速获得数千个位点的短DNA序列，为收集基因组信息提供了深度潜力(Mardis 2008)。

此外，除了监测长期繁殖成功以及栖息地恢复和保护工作的影响等性能特征外，基因标记还可用于解决进化、人口统计学和行为方面的问题(Palsbøll等，1997年)。BOB国际体育处理这些问题的渔业科学家将需要更新他们对适当的、科学上接受的遗传识别系统的知识，以适应其潜在的应用(Lincoln 1994;Poompuang和Hallerman 1997)。

6.5稳定同位素

稳定同位素是非放射性的，自然存在的化学元素形式，不会自发衰变，通常能量稳定。某种特定化学元素的稳定同位素质量不同，但在其他方面具有相同的化学性质。与受到严格监管的放射性同位素相比，稳定同位素的使用不需要特别批准的设施和许可证。同位素分馏已经在自然系统中研究了多年，稳定同位素比率现在被相对频繁地用于鱼类标记。稳定同位素可以为营养食物网结构、饲料效率、鱼类洄游和原产地、污染物生物积累以及其他生理和生态过程的研究提供信息。多种元素(如H、C、N、O、S、Sr和Ba)可以用作天然标记，也可以人工施用。某一特定元素的重、轻稳定同位素(以δ2H、δ13C、δ15N、δ18O、δ34S或87Sr/86Sr表示)比值的变化可被高精度测量，并可用于确定这些化学元素的来源，并在个体动物、种群或生态系统中追踪它们。

为了获得鱼组织，可能需要镇静(见节)7.11鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质)或牺牲可能是必要的。根据研究目标的不同，可以使用鳞片、切片的鳍射线或刺、鳍夹或肌肉组织样本进行非致死取样，以进行稳定同位素分析。作为代谢惰性结构的耳石取样也很常见。耳石、鳍射线或刺等结构为研究人员提供了同位素特征的时间记录，并有机会跟踪生物生命周期中的运动和/或食物来源(Chapman et al. 2013)。不同类型的代谢活性组织有不同的元素周转率;因此，每个研究者必须确定哪些组织可以提供满足研究要求所需的材料。Fry(2006)和Rubenstein和Hobson(2004)提供了在动物生态学中使用稳定同位素的代表性信息。Elsdon等人(2008)回顾了耳石化学作为确定鱼类环境历史的技术。

6.6脂肪酸

与稳定同位素类似，脂肪酸可以作为生物标记物来识别食物网中的营养途径、捕食者-猎物关系以及异源(远程)与本地(本地)输入的相对贡献。脂肪酸作为生物标志物的使用是基于这样一个原理:鱼类和许多其他水生生物是由它们所吃的东西组成的。脂肪酸一旦被消耗，就可能被分解为能量或被生物转化，因此组织内的脂肪酸分布往往反映了膳食脂肪酸的分布。有些脂肪酸不能由脊椎动物合成(即18:2n-6[亚油酸]和18:3n-3[α -亚麻酸])，或相对于膳食摄入量合成的量不大(例如20:4n-6[花生四烯酸]，20:5n-3[二十碳五烯酸]，和22:6n-3[二十二碳六烯酸]);因此，它们是最近营养史的特别有用的指标。就稳定同位素而言，不同的组织有不同的代谢周转率;因此，准确地说，将组织脂肪酸谱与摄食行为的时间记录联系起来的努力涉及验证研究，以确定谱变化率。不同的脂类和组织类型具有“特征”特征，使它们对饮食摄入量和环境条件等变化做出不同的反应。例如，磷脂图谱往往包括某些饱和脂肪酸(例如，16:0)和多不饱和脂肪酸(例如，18:2n-6和长链多不饱和脂肪酸)，而三甘油酯图谱往往具有更多样化的脂肪酸组成。传统上，肌肉和肝脏组织被用于分析，牺牲动物是必要的。 However, adipose fin clips have shown utility for such analyses (M. Young, J. Trushenski, and G. Whitledge, unpublished data). For more information on the role of fatty acids in aquatic ecosystems and the use of fatty acids as biomarkers, see Arts et al. (2009); for more information on essential fatty acids and lipids in fish nutrition, see Tocher (2003).

7.实验室活动

7.1一般原则

在实验室条件下处理活鱼需要注意许多细节，涉及所研究的特定物种的要求和耐受限度。必须提供可接受的有形设施和足够的优质水供应，即使只在短时间内饲养鱼类。虽然鱼类可以忍受边际设施和条件几个小时甚至几天，但将它们放在低于最佳条件下会影响研究结果。也必须保持人道对待动物的标准，不管鱼被关了多长时间。

读者应该注意，第7节的一些内容并不局限于实验室活动，但也可能适用于现场情况。

7.2禁闭、隔离和检疫

在将鱼类带入实验室之前，应准备好设施和计划，以确保鱼类不能逃脱，特别是非流域本地的鱼类，并将引入的鱼类与已经存在的鱼类隔离开来。每个收容单位应有自己的一套渔网和其他设备。以前用于研究的设施和设备在用于新的研究之前应进行消毒，通常使用氯化消毒剂或其他消毒剂，如维康^®水生(www.wchemical.com/)．如果引进的鱼类可能携带病源，特别是非该地区特有的病原体或寄生虫，应使用检疫级别的设施。所要求的隔离级别将根据已知或疑似疾病病原体的严重程度而有所不同(见节)2.5鱼类健康管理:病原体和寄生虫的控制)．

怀疑健康状况不佳的个体鱼应与其他鱼隔离，以消除潜在致病因子传播的可能性。这些鱼应由具有鱼类疾病专业知识的个人(鱼类病理学家或兽医)进行评估，并应按照指示使用适当的治疗剂。为特定疾病的治疗提供指导不在本文件的范围之内。强烈敦促调查人员与具有鱼类健康专业知识的个人建立工作关系，他们可以向他们咨询。

非本地鱼类、转基因鱼类或其他转基因鱼类的实验是一种特殊情况，需要额外的预防措施来防止它们逃跑。持有非本土物种可能需要州野生动物机构的实地考察许可(见章节)3.4许可证和证书)．具体的屏障可以类似于用于防止病源逃逸的屏障，但必须根据实验室或实验设施的物理特性进行设计。美国农业部为自己的设施制定了规范，并公布了自愿准则(USDA 1995a, 1995b)，旨在确保适当考虑研究活动的潜在遗传和生态影响。这些美国农业部指导方针(1995a, 1995b)有助于确定适当的程序和保障措施，以便研究可以在不对环境造成潜在不利影响的情况下进行。为制定设施检查指南和风险管理程序、适当的位置、密封结构的建造和非结构密封战略提供了建议。研究转基因或其他转基因动物的机构准则必须有足够的变化，以适应特定地点和特定研究的目标，但应足以确保在洪水或其他自然灾害或设备故障期间不会发生意外释放。最终，每个科学家都有责任确保动物的安全。

用于饲养新引进鱼类的单位所排出的污水应予以处理。至少，污水应该通过开口足够小的筛网，以保留任何逃脱的鱼类，反过来，如果预计会出现病原体和寄生虫，则应使用化学或其他处理方法杀死所有病原体和寄生虫。进行可控疾病制剂研究的设施(见世界动物卫生组织名单)http://www.oie.int/our-scientific-expertise/specific-information-and-recommendations/animal-disease-information/)必须有独立的、自给自足的单元进行研究，并必须限制未经授权的个人进入这些单元。(见附录表2参阅世界卫生组织鱼类和两栖动物须呈报的疾病清单。)此外，物理屏障必须到位，具有足够的容量，以防止在所有存储单元清空的情况下任何水流出(USDA 1995a, 1995b)。

许多常见的鱼类病原体是机会性的，几乎存在于所有环境中。有些是难以避免的(例如，黄杆菌属columnare柱状瘤病的病原体);另一些则是专性病原体，如果它们不在宿主鱼类中，则只能存活有限的一段时间(例如，五大湖和圣劳伦斯河中的病毒性出血性败血症病毒[VHSV]基因型IVb)。虽然研究者可以通过良好的管理来减少机会性病原体的问题，但必须避免专性病原体。这通常可以通过建立一个综合的鱼类健康管理计划，并由适当合格的鱼类健康专业人员定期进行鱼类健康检查来实现。调查人员必须了解在开展工作的特定地理区域存在问题的某些疾病和病原体(如VHSV - IVb)，并应敏锐地意识到新出现的疾病。美国农业部国家入侵物种信息中心是特定微生物的资源(http://www.invasivespeciesinfo.gov/microbes)．无论如何，实施生物安全协议是一种有效的策略，可以最大限度地减少(如果不能消除)局部或普遍存在的病原体和入侵物种传播的风险。因此，生物安全(见3.2节生物安全)是现场研究和实验室研究的重要考虑因素，无论是否特别要求严格的生物安全协议(例如，在处理应由世界卫生组织报告的鱼类病原体时，包括或有害鱼类物种;看到附录表2以及USFWS关于有害野生动物的信息，http://www.fws.gov/injuriouswildlife/)．

全面的生物安全计划可以远远超出简单的消毒程序，还可以包括关于各种主题的信息，如收容设施的布局和设计、鱼类的采购和检疫以及记录保存(见节)3.2生物安全)．构成有效生物安全的要素因环境或研究场景而异。水产养殖中使用药物、生物制剂和其他化学品指南(AFS鱼类养殖部分2011年)http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/AFS%20FCS%20Guide%20to%20Drugs.htm)提供有关消毒和生物安全措施的额外资料和资源。本文件中包括一个表，概述了可能用于可能与水生动物接触的野外设备和坚硬表面的各种消毒剂(如碘、酒精、氯)(美国水产协会鱼类养殖部分，2011年)。

7.3适应实验室条件

在研究开始之前，应该给鱼类时间来适应新环境(见第5.8节)、饲料和日常活动。对变化的缓慢适应通常是至关重要的(Casebolt et al. 1998)。鱼类在转移后48-72小时出现急性健康问题并不罕见。对于一个物种来说，在实验中和实验之间的驯化时间应该是标准的和特定的。可能需要进行初步研究，以确定在个别研究中使用的最合适时间。常用的适应期为1-2周。

为了减轻在将鱼转移到实验室时对微生物剂的担忧，可以以25 mg/L的福尔马林作为长时间的浴液，并对保持系统进行额外的曝气。福尔马林在给药后12-24小时内会增加分解过程中的化学需氧量。在最初的养鱼期间，福尔马林浴通常每隔3周重复一次。盐是另一种可用的化合物。如果鸡蛋或带眼的鸡蛋从野外带入实验室，可以使用其他消毒剂，如碘、过氧化氢或福尔马林。调查人员可以参考蓝皮书(AFS-FHS 2012)，了解有关病原体、鱼类和建议方法的详细信息。

调查人员应注意，实验室饲养条件可能导致从野外带来的动物发生生理变化。即使没有压力的视觉迹象，免疫抑制(Miller和Tripp 1982)或潮汐节律或昼夜节律丧失也可能发生。(见部分4.2压力．)

7.4长期饲养鱼类的设施

实验室培养系统基于各种各样的设计，从少数水族箱到大型系统，包括水族箱、沟道和池塘。众多的鱼类有各种各样的需求;因此，实验室的设计应该是灵活的，并容纳所有潜在的兴趣。通常，系统被布置为流动系统，有恒定的淡水流量(“单通道”);然而，设计良好和适当运行的再循环系统可以保持足够甚至更好的水质(Malone和Beecher 2000;参见7.8水循环装置)．

培养系统将根据实验室的物理大小、水的可用性、鱼类的种类、试验动物的数量和密度而有所不同7.5动物密度)，以及成本考虑。在许多类型的系统中都可以成功地饲养和养护鱼类，但每种鱼类都有最佳条件(见5.7节临时饲养和养护设施)。在设计中，最小化压力应该是确保实验动物质量的首要因素。充足的水量和流量模式将提供充足的溶解氧和冲洗代谢废物(Piper等人，1982年)。还应考虑消除或至少减少疾病媒介在一个系统内的潜在传播。不仅渔网和其他实验室设备等物品被怀疑是病原体传播的载体，而且含有病原体的气溶胶在空气中的运动也是鱼类病原体传播的重要手段(Wooster和Bowser 1996;Bishop et al. 2003;参见7.2禁闭、隔离和检疫)。实施病原体控制措施是鱼类生物医学研究设施的重点，因为潜在疾病或慢性感染会影响宿主生理和其他研究终点(Lawrence et al. 2012)。

设计和建造不当的设施会阻碍研究活动，因为它们无法保持所需的鱼类质量、数量、大小或种类。如果管道和阀门将重金属或其他污染物排放到水中，那么质量和数量优良的水可能对鱼类失去作用(Brauhn和Schoettger 1975;另见节7.7水质)．(水质不佳和污染化合物会影响生理参数和行为)。地漏应数目众多，间隔适当;地板不需要防水，但应该是防滑的。接地故障中断的电气连接将确保动物和人员的安全。设备检查和维护以及动物饲养和记录的日志通常在住房设施中使用。建筑材料可以尽量减少与潜在有毒物质的接触。容纳系统组件(例如，储罐，阀门，输送管线和排水管)的适当建筑材料包括玻璃，316型不锈钢，尼龙，氟碳塑料，混凝土(ASTM 2013)，聚乙烯片，刚性PVC，特氟龙^®和玻璃纤维(美国陆军工程兵团1991年)。应避免使用黄铜、铜、铅、锌和橡胶(ASTM 2013)，也应避免使用腐蚀性物质(Hawkins 1981)。定期监测水质是必不可少的(见章节)7.7水质)．为咸水鱼类设计的系统需要额外注意与盐度有关的因素和潜在的腐蚀影响，但上面讨论的相同的一般设计考虑因素是适用的。

7.5动物密度

一个实验单元能容纳的鱼的密度取决于一系列的环境因素。最紧迫的问题是维持溶解氧的供应以及水温和海拔(Piper et al. 1982)。废物的积累，特别是氨的积累，通常是限制密度的下一个因素(Piper et al. 1982)。鱼的需氧量和氨排泄量与供给量有直接关系。饲料的量反过来又由单元中鱼的数量和大小决定。一般来说，由于不断补充溶解氧和去除氨，流动系统比静态系统可以维持更大的鱼类密度。然而，在再循环系统中使用的珠状过滤技术增加了可以维持的鱼类密度(Malone和Beecher 2000;参见7.8水循环装置)．如果鱼的密度大于通过直接大气交换所能维持的最低水平，则静态装置必须配备曝气和木炭过滤设备。一般来说，最好将溶解氧浓度保持在接近饱和的水平，对于大多数物种来说，溶解氧浓度不要低于5毫克/升。氨浓度应该接近于零，特别是在较高的pH值水平(见节)7.7水质)．生理压力、对病源的易感性和病源的传播是确定密度水平时必须考虑的其他因素。

鱼因种而异，甚至在一个物种内，在行为模式被破坏之前，它们所能忍受的拥挤程度也是不同的。不能提供具体的指导方针，但拥挤的潜在影响应包括在每个研究设计(Piper et al. 1982)。一般来说，实际密度由水处理和饲料输送系统决定，并在社会互动决定的密度下达到最大值。假设溶解氧水平、其他水质因素和摄食问题已经得到解决，在成群的物种中，这个“社会点”可能非常高。研究人员和IACUCs被警告要认识到不同物种和特定研究的适当密度的可变性。没有适用于所有物种的标准、首选密度。

7.6饲料和喂养

虽然大多数种类的成鱼可以在没有食物的情况下存活数周(特别是在较低的温度下)，但为了作为研究对象保持令人满意的状态，必须为它们提供可口和满足基本营养需求的食物。洄游鱼类或其他将禁食作为其生命周期或行为的正常一部分的鱼类可能是这一一般规则的例外。对一个物种的生活史进行回顾可以为其摄食需求提供指导。如果不知道营养需求和生命阶段，在自由放养的个体的饮食中找到平衡的食物组合应该能提供足够的营养。不能假定提供天然食物，特别是单一种类的食物，就能完全满足圈养鱼类的营养需求。一些物种可以相对容易地训练接受配方饲料，从而消除了提供天然食物所固有的问题，如高成本、不方便和无意中引入病原体。

配方饲料可以被期望提供这些饲料所设计的物种的营养需求，特别是如果按照特定成分列表(开放式配方)的规格制造。虽然圈养的鱼经常会食用为其他物种设计的饲料(例如，食肉鱼会食用为虹鳟鱼设计的饲料)，但如果这些饲料被长时间使用，它们的营养需求可能无法满足。商业化的配方饲料通常不是基于特定的成分列表(封闭配方)，而是为了满足蛋白质、碳水化合物和脂肪的广泛营养需求而设计的。为满足饲料提供的保证分析描述而选择的特定成分在批次之间可能有很大差异，即使近似成分(蛋白质、碳水化合物、脂肪)保持不变。因此，饲料可以满足总体的宏量营养素需求(如蛋白质)，但不一定能满足每种鱼类的特定营养素(如必需氨基酸)的最佳水平。研究人员在设计研究时必须考虑成分的可变性对实验对象生理学的可能影响(Barrows和Hardy 2001)，并在选择饮食配方时考虑咨询饲料制造商或鱼类营养学家。改变饮食会对实验动物产生影响(Gatlin 2010;见南方区域水产养殖中心的情况说明https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/viewAllSheets/)．

所提供的饲料量将根据食物的营养和能量含量，以及鱼的年龄和大小，以及环境条件，特别是水温而有所不同。除非研究设计或其他后勤要求降低喂食率，否则喂食至饱是正常的做法。根据制造商的说明，配方饲料的重量通常低于天然食品的要求，因为配方饲料的水分含量比天然食品低。通常情况下，配方饲料的用量为每天鱼重的1%至8%，这取决于水温以及鱼的种类、大小和年龄。最佳喂食时间取决于特定物种的行为，但通常可以修改，以适应鱼类饲养员的合理时间表。如果鱼类通常在夜间或黄昏和黎明进食，最好在它们自然进食的时间提供饲料。大多数配方饲料可以通过各种机械喂食器或由鱼自己触发的需求喂食器来分配。饲养方法与饲养密度的结合可能会对行为和应力产生不同的影响(Attia et al. 2012;参见7.5动物密度)．机器喂食有可能防止鱼习惯于喂食人员的存在，并允许灵活的喂食时间表。过量的未食用饲料应在喂食后短时间内从水箱中清除，因为它会降低水质，并有利于真菌生长。水质会因饲料的累积而降低，水溶性营养物质会从水浸泡的颗粒中滤出。

7.7水质

提供适当的物理和化学质量的水可能是照顾和养护圈养鱼类的最重要的因素。由于25000多种鱼类中的每一种都有其自己的最佳条件和耐受限度，研究者有责任确定所研究鱼类的最佳条件。将鱼转移到温度超出其耐受极限或超过其适应能力的水中，可导致立即或延迟死亡，通常在72小时内死亡。水温的突然变化，哪怕只有5°C，都会引起健康鱼类的应激反应。有经验的调查人员不会常规地将鱼暴露在每天超过2°C的温度变化中。容忍温度变化的极限和能力受到个体鱼以前的热历史和物种特征的影响(Carmichael等人，1984a;贝尔卡1986)。

水中有毒物质的存在或溶解氧的缺乏会使放入水中的鱼类立即死亡。慢性水质问题，如亚硝酸盐水平升高，可能不会引起明显的反应，但会严重影响鱼类的生理和研究结果。在引入鱼类之前，应该分析用于饲养鱼类的水的硬度、碱度(缓冲能力)、主要阳离子(钠)等参数^{1 +}K^{1 +}、钙^{2 +}、镁^{2 +})，主要阴离子(CO_3.^{2 +}, Cl^{1 -}, HCO_3.^{1 -},所以₄^{2 -})、重金属和杀虫剂。应定期监测温度、溶解氧、氨、碱度、亚硝酸盐和pH值。在软水或缓冲不良的水的情况下，pH值的大幅变化可能会导致不利的影响。非电离氨对鱼类毒性很大，是鱼类应激甚至死亡的原因，特别是在较高的pH值下。在这些情况下，可能需要添加缓冲剂。必须了解温度和海拔对水质参数的影响，并设法将条件维持在可接受的范围内(Boyd 1985;Avault 1996;Colt和Tomasso 2001)。

应定期监测经过氯化处理的城市水或任何供水，特别是监测可立即产生有毒反应的游离氯。脱氯设备，如活性炭过滤器和化学品(如硫代硫酸钠)，可以将游离氯降低到无法检测到的浓度。即便如此，水中仍可能残留极低浓度的氯副产品或代谢物。这些化学物质通常不会造成短期的不良影响，但应考虑其潜在影响，并监测其浓度是否会影响结果。

水中的污染物有可能影响鱼类的生理特性，鱼类经常被用于生态系统监测项目5.2.3代表性样本)．例如，来自污水处理厂和工业来源的下游水可能含有内分泌调节剂或干扰物(例如，Arukwe 2001;Kolpin et al. 2002;Jenkins et al. 2013)。越来越多的证据表明，饮用水本身可能含有各种个人护理产品和药物，尽管浓度非常低(Benotti et al. 2009)。

7.8水循环装置

在过去的三十年中，水循环系统在水产养殖中的出现为鱼类养殖者和研究人员提供了一些好处。消除了传统鱼类养殖系统所需的大量供水需求和特定气候条件;鱼类可以全年生产和饲养，有机废水排放对环境的影响也减少了(见节)7.9污水和许可证)．再循环技术已用于连续装载非常高的鱼密度(Van Gorder 1991;Malone和Beecher 2000)和其他用途，如对虾的孵化场Macrobrachiumsp和亲本成熟(Millamena等，1991年)。

再循环系统的效率取决于其设计中使用的组件。通常，每个系统将包括具有生物过滤、固体澄清、曝气、pH控制、减少生物需氧量、水循环和维持适当碱度、氨氮和亚硝酸盐氮水平的单元。生物过滤器是循环水养殖系统的核心组成部分。其他部件可能包括泵，罐，澄清器，曝气和氧化组件，紫外线灭菌器或臭氧发生器，和水池。停电时的备用电源是资产。

几种类型的生物过滤器可用。那些硝化效率最高的植物在控制氨和亚硝酸盐水平方面发挥了最好的作用。硝化作用:由细菌完成的硝化作用亚硝化单胞菌，硝化螺菌属,硝化菌属是氨的去除过程，由氨的连续氧化到亚硝酸盐，最后氧化到硝酸盐。)为了建立活跃的硝化细菌种群，在放养高密度鱼类之前，生物过滤器必须经过几周的预处理。盐水系统的最大硝化能力低于淡水系统;然而，淡水生物过滤器适应更高的盐度可以提供缩短海水系统启动时间的工具(Nijhof和Bovendeur 1990)。

在设计和运行再循环系统时，应制定管理计划，以在疾病爆发等异常情况下维持系统的功能。生物过滤器细菌可被治疗性抗菌剂和杀寄生虫剂杀死(Heinen等，1995年)。在将鱼类引入再循环系统之前，适当的启动程序和预处理是必不可少的。

7.9污水和许可证

养鱼设施会产生废水，必须考虑这些废水对接收生态系统的潜在影响。流出物可以连续或周期性地排放，也可以与其他废水结合，也可以直接排放到污水处理厂或其他市政排水系统或湿地，但最终它们将进入公共水体。从湿式实验室流出的大多数废水可以安全地添加到处理厂甚至公共水体中。

可接受的排放贡献的监管权力和决定最初取决于环保署或EPA授权的机构，如州当局(Hindrichs和Cormier, 2009年)。排放废物或污染物进入美国水域需要一个国家污染物排放消除系统(NPDES，http://cfpub.epa.gov/npdes/)许可证。NPDES许可证规定了可以安全排放的污染物和浓度。禁止排放许可证中未列明的污染物。这种许可证通常由研究机构持有，除非污水排放到污水处理设施中。在后一种情况下，该处理设施将持有NPDES许可证。直接排放者(如养鱼场)均须获得个别的“非有害发展计划”许可证。渔场被EPA指定为集中的水生动物生产设施，根据他们的规模和生产的鱼的类型(CFR 2000)。冷水鱼类设施，例如每年生产9090公斤鱼或每月喂养2272公斤鱼的鳟鱼和鲑鱼(鲑科)养殖场和孵化场，被归类为集中式水生动物生产设施，需要NPDES的许可。每年排放污水30天或每年鱼类产量超过45454公斤的温水设施也需要NPDES许可。较小的水产养殖设施可能需要许可证。 Investigators conducting tests in aquaculture facilities where an undeclared pollutant, such as a new drug treatment, might be discharged need to contact the EPA or its designee to determine safety. Often, the facility operator will need to amend their Notice of Intent (NOI) to be covered under a particular NPDES permit to include the new drug in their discharge (see section7.11鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质)．未能在排放前获得排放批准将违反《清洁水法》(2002年美国法典)，并可能导致巨额罚款和监禁。

7.10圈养的危险物种和标本

除了5.5节中提供的建议外，在实验室条件下饲养危险物种的调查人员应提供专门的饲养单元，以控制危险动物所带来的具体问题。与实地研究一样，在危险物种实验室工作的人员必须接受培训，并配备个人防护装备，以解决与每个物种相关的具体问题，并且个人不应单独工作。在开始调查或安置危险物种之前，必须制定正式的工作危害分析。这项分析是主要研究员、研究所的环境健康和安全官员以及IACUC之间的合作努力，特别是IACUC的兽医的咨询。这份工作风险分析(见https://www.osha.gov/Publications/osha3071.html)将考虑熟悉这些问题、物种和标本的行业和/或联邦政府机构可能提供的任何信息。

7.11鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质

应该避免长时间的、有压力的克制。在某些情况下，一般镇静抑制可能是可取的(Mundy和Wilson 1997);然而，镇静的好处和对从镇静鱼类获得的数据的潜在影响可能需要与从未镇静鱼类获得的结果进行比较。必须考虑对实验鱼的所有潜在影响，而不仅仅是镇静的特性。所选择的镇静剂应能使患者迅速恢复正常的生理和行为状态(Smith et al. 1999;Bowker和Trushenski 2011)，对人类和鱼类来说都是一种低风险的化合物。在广泛使用该化合物之前，应在少量鱼类样本上进行测试。注射镇定剂的动物必须保持观察，直到恢复正常为止。

各种研究人员使用了以下物质(其中一些是受控物质，只能通过适当许可的来源获得，如兽医):苯佐卡因、丁香油、安定(安定)、戊巴比妥钠和三卡因甲烷磺酸盐(MS-222)。体温过低，暴露在亚致死水平的一氧化碳中₂(一种LRP药物;参见5.4.2低监管优先级(LRP)药物而且附录表1)已用于其他镇静剂禁忌的情况。FDA唯一批准用于鱼类的镇静剂是MS-222，但在处理过的鱼被释放或被人类食用之前，需要21天的停药期。

FDA允许研究人员在药物的选择和使用方面有一定程度的选择，包括镇静剂，如果使用的鱼类仅用于研究，而不是用于消费或释放。对FDA政策的严格解释将只允许这种选择用于已批准的药物研究，该药物的排放符合当地NPDES许可;然而，实施实践通常允许更大的灵活性(参见第7.9污水和许可证)．FDA兽医医学中心(CVM，http://www.fda.gov/AnimalVeterinary/default.htm)或USFWS AADAP计划(http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/home.htm)，以决定目前的做法和优先次序。

FDA药品批准的复杂性和药物在研究中的实验性使用最近与丁香油有关的行动说明了这一点。任何形式的丁香油都不能用于可能被人类食用的鱼类，即使是在实验室环境中进行的处理。这包括濒危物种或其他可能被释放到公共水域供人类食用的物种。在撰写本文时，只有CO₂(作为LRP药物;看到附录表1)和丁香酚(AQUI-S^®20 e;在USFWS INAD豁免下)可以用作立即释放的镇静剂(见5.4节鱼类的现场约束:镇静剂)。另外，当鱼类需要多次镇静、无法释放化学镇静剂或需要立即将鱼类释放到环境中时，电镇静或电麻醉可能是化学镇静的合适替代方法(Trushenski等人，2012a, 2012b)。

7.12外科手术

外科手术被写入许多研究计划，包括植入包括标签和发射器在内的设备、检查内部器官(如生殖腺)和移除器官等过程。成功的手术取决于手术的复杂性，个人的专业知识，以及手术的环境。要在鱼身上做手术，个人需要训练和实践经验。一般来说，渔业生物学家BOB国际体育缺乏正规的外科教育培训，因此，培训应由具有长期经验、广泛的外科专业知识和鱼类手术成功记录的个人提供。机构提供的正式培训机会将有利于建议使用外科手术的研究人员。适合接受培训的人员可以是具有鱼类经验并与IACUC有联系的兽医，在机构中为动物(包括鱼类)提供健康监督的兽医小组成员，或在成功实施鱼类外科手术方面具有丰富经验的调查员。培训内容包括外科手术的原则和具体手术的指导。在培训结束时，受训者将向导师证明他们有能力进行及时有效的手术，类似于他们研究中提出的程序。

外科手术的书面方案应该明确手术是大手术还是小手术。大手术是一种穿透或暴露体腔的手术，或一种产生重大生理或生理损伤的手术。大手术的例子是在体腔内植入无线电发射器，或者脾切除术。小手术的侵入性较小，不会穿透或暴露体腔，也不会造成实质性的身体或生理损伤。小手术的例子包括在血管中放置导管或在肌肉中植入PIT标签(见节)6.3内部标签和标记，以及生物遥测)。

鱼的水生特性需要外科手术，这在非水生动物中是不常见的。鱼的体表并没有被角质化的表皮所覆盖，而是被各种活细胞和粘液所覆盖，这些活细胞和粘液提供了物理和免疫的外部屏障。由于许多消毒剂会损害鱼皮，手术部位的完全消毒可能是不可能的(Stoskopf 1993c);手术部位的准备工作一般包括轻柔地清洗多余的粘液。努力避免手术野污染和术后感染是非常重要的。

与设备齐全、设计精良的实验室或手术室相比，在制定手术方案时必须考虑无菌后勤的现实、务实问题。外科手术中所有无菌技术(如手术服、口罩、悬垂布的使用)的使用能力受到手术环境的影响。手术的类型是大手术还是小手术，当大量鱼类将接受手术时，必须在偏远的地点进行。有报告记录了在非实验室条件下对鱼进行成功手术的技术调查(Jepsen et al. 2013)。这些报告记录了手术过程中合理的偏差，但仍能导致手术成功。NRC(2011: 115)的声明，“可能需要修改标准技术(例如，在水生或野外手术中)，但不应损害动物的福祉，”暗示主要研究者是务实的。

研究人员应审查已发表的研究，以确定其与他们建议实施的程序的相关性。偏离标准外科手术程序的一个领域可能是鱼与鱼之间器械的灭菌。在要处理大量鱼类的偏远地区，可能无法使用高压灭菌器或其他标准灭菌设备。在这种情况下，可将仪器浸泡在1:10 0的苯扎氯铵或其他季氨化合物(Summerfelt和Smith, 1990年)和70%乙醇溶液中进行鱼间仪器消毒，然后在使用前用无菌水冲洗仪器。在手术间隙处理手术器械的其他选择是热珠灭菌器或紫外线系统(Walker et al. 2013)。方法的组合可能是合适的。在任何情况下，手术团队都应尽最大努力避免手术野受到污染。

根据所使用的麻醉剂(即MS-222)以及鱼在术后保持期间是否会受到压力，在将其释放到环境中之前，可能需要暂时监禁一段时间，因为它们可能会被运动钓鱼社区捕获和食用(见节)5.4.1批准用于鱼类的药物)．由于可能对鱼类进行的外科手术多种多样，本指南中提供的信息并非旨在提供鱼类手术的详细指南。更多的细节可以在Deters等人2010年，Stoskopf 1993c, Summerfelt和Smith 1990年，Smith和Bell 1967年，Wooster等人1993年找到。关于手术植入的信息见于Liedtke等人2012年、chmyshyn等人2011年、Cooke等人2011年、Brown等人2011年和Wagner等人2011年6.标记和标签)．

一般来说，列入名单的濒危物种必须非侵入性处理，如果要做手术，需要许可证(见5.2.4收集濒危物种)。

7.13药品、生物制剂和其他化学品的管理

使用鱼类药物、生物制剂和其他化学品的研究人员有责任遵守联邦、州和地方法规。每次使用都要作详细的记录。

7.13.1药物

《联邦食品、药物和化妆品法案》(FD&C Act 2013，http://www.fda.gov/RegulatoryInformation/Legislation/FederalFoodDrugandCosmeticActFDCAct/default.htm)根据其预期用途，将药物部分定义为“用于诊断、治愈、减轻、治疗或预防疾病的物品”和“旨在影响人或其他动物身体结构或任何功能的物品(食品除外)”。根据这些定义，几乎任何用于鱼类的产品都被认为是药物。所有用于控制与细菌性疾病或寄生虫感染密度相关的死亡率、镇静或麻醉鱼类、诱导产卵、改变性别或改变水生物种的结构或功能的药物都必须得到FDA的批准。冰是一种无害的化合物，因此被认为是一种药物，因为它可以减缓代谢速率，盐被认为是药物，因为它对渗透调节有影响。FDA批准药物作为化合物，其数据已由CVM评估(附录表1)，并且他们认为这些成分能够有效地达到所述的要求，包括对目标鱼类、对处理过活性成分或食用过处理过的鱼的人以及在标签剂量下使用时对环境是安全的。药品必须按照FDA CVM标准生产，并以确保使用符合性的方式进行包装和标签。FDA可以要求调查人员提供使用药物的完整记录。

目前，还没有一种药物被“有条件地批准”用于鱼类。有条件批准允许一种药物在FDA完成数据收集和验收之前合法上市。有条件的药物批准意味着化合物看起来是安全的，是根据FDA CVM标准生产的，并显示出有效性;然而，这种化合物通常并不广泛使用。非法使用鱼类药物包括(1)为任何目的使用未经批准的药物或(2)以产品标签上规定的方式以外的方式使用已批准的药物(除非INAD豁免中列出或由持牌兽医规定在标签外使用)。禁止跨州运输未经批准用于任何动物(包括鱼类)的药物。有关已批准和正在研究的新动物药物的更多信息，可在AADAP (http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/home.htm)或FDA CVM (http://www.fda.gov/AnimalVeterinary/default.htm)网站。一项规定允许在教学环境中对动物使用药物，如CFR 1976所述。

有执照的兽医有权为药物开出标签外的用途(见2.5节鱼类健康管理:病原体和寄生虫的控制)。有些化学品只能通过兽医合作使用(例如，Chorulon^®，兽药饲料指令药物)。

7.13.2生物制剂和其他化学品

对鱼类使用“生物制剂”一般是指疫苗、细菌素、抗血清、诊断试剂盒和其他生物来源的产品。这些兽医和研究产品用于诊断、预防或治疗动物疾病，一些已获许可的商业生物制剂已被批准用于鱼类。关于在水产养殖中的使用，请参见美国农业部APHIS项目援助号1713兽医生物制剂:使用和监管(美国农业部2013年，http://www.aphis.usda.gov/publications/animal_health/content/printable_version/vet_biologics.pdf)和疫苗在鱼类养殖中的应用(Yanong 2011，http://edis.ifas.ufl.edu/fa156)，如欲了解详情，请参阅美国农业部兽医生物制剂中心(CVB)网站(http://www.aphis.usda.gov/wps/portal/banner/help?1dmy&urile=wcm%3Apath%3A/APHIS_Content_Library/SA_Our_Focus/SA_Animal_Health/SA_Vet_Biologics)，对产品进行监管，以及AFS鱼类养殖业部分关于在水产养殖中使用药物、生物制剂和其他化学物质的指南(AFS鱼类养殖业部分2011，http://www.fws.gov/BOB国际体育fisheries/aadap/AFS%20FCS%20Guide%20to%20Drugs.htm)．

7.13.3化工设施反恐标准(CFATS)

如果某些水产养殖药物被释放、被盗、转移或用于破坏或故意污染目的，可能会带来安全问题。储存这些化学品的设施可能由国土安全部(DHS，http://www.dhs.gov/)根据《2007年化学设施反恐标准》(CFATS)http://www.dhs.gov/chemical-facility-anti-terrorism-standards)．制造、使用、储存或分销某些化学品达到或超过规定数量的设施可能受到管制。每个设施负责评估自己的化学品使用模式，并确定哪些化学品受CFATS约束。国土安全部已经确定了200多种感兴趣的化学品(联邦登记册2007，http://www.dhs.gov/xlibrary/assets/chemsec_appendixa-chemicalofinterestlist.pdf）;与渔业研究设施特别有关的一些设施包括BOB国际体育

福尔马林/甲醛溶液—大于或等于1%溶液且大于或等于15,000磅时储存。
过氧化氢——大于或等于35%溶液，大于或等于400磅时储存。
高锰酸钾-当商业级和大于或等于400磅时储存。

如果被国土安全部确定为高风险，设施可能需要制定场地安全计划(www.dhs.gov chemicalsecurity)．

8.实验动物的最终处置

8.1安乐死

有几种方法可以使鱼安乐死。各种监管机构或授权机构可能会要求具体的安乐死方法和书面协议，以证明对人道治疗的充分重视。美国兽医协会(AVMA)动物安乐死指南:2013年版(AVMA 2013年)列出了一些安乐死方法。https://www.avma.org/KB/Policies/Documents/euthanasia.pdf)，以及《实验动物护理和使用指南》(NRC 2011)中的一般考虑。

一般来说，在派遣之前，这些程序必须在最小的压力下快速执行。脊髓脱位或斩首通常是可以接受的方法，只要手术进行得迅速准确。一些IACUCs已经批准了可以通过冰浴冷休克对小鱼(总长<5厘米)实施安乐死的方案(Wilson et al. 2009;Blessing et al. 2010)。在镇静后将小鱼浸泡在液氮中可立即安乐死(Schaffer 1997);但是，在使用这种方法之前，应与国际审计委员会或其他监督机构讨论这种方法及其适当性。根据鱼的大小和实验需要，在安乐死之前可能需要进行某种形式的物理麻醉，如体温过低。冷休克和电击通常用于准备屠宰大量动物的鱼类加工者，在这种情况下，鱼可能被视为商品而不是研究标本。少量的鱼可以通过接触相对高浓度的镇静剂(如MS-222)而安乐死;然而，使用MS-222 (AVMA 2013，https://www.avma.org/KB/Policies/Documents/euthanasia.pdf)和其他化学镇静剂作为安乐死剂还没有被FDA批准，这些化学安乐死的鱼可能不能供人或动物食用。参见7.11鱼类的限制:镇静剂和相关化学物质．见Coyle等人(2004)关于水生动物麻醉的使用，包括常用养殖鱼类的剂量(南部区域水产养殖中心的情况说明3900)https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/getFactSheet/whichfactsheet/162/)．通过简单的缺氧(脱水)安乐死有时是在强制减少生产水平设施的人口;但是，在研究情况下不建议使用这种方法。如果大量的鱼必须安乐死，建议用电击击晕，然后快速斩首或冷休克。鱼藤酮可以阻止氧气的吸收，在发生意外外来物种的情况下很有用(Rayner和Creese 2006)(见章节)5.2.3代表性样本)．安乐死方法的选择应与IACUC机构协调进行。其他信息由佛罗里达大学推广服务提供，其中涉及鱼类屠宰、杀害和安乐死方法的出版物进行了审查(Yanong et al. 2007，http://edis.ifas.ufl.edu/pdffiles/FA/FA15000.pdf)．

在海上进行的海鱼调查提出了一套关于安乐死的特殊条件。捕获方法往往会导致一次收集大量的标本。关于性别、性成熟和胃内容物的信息可以从处理时未死亡的个体中获得。在这类调查中，可使用斩首或穿刺个别鱼类以去除耳石，但这些技术不适用于处理大量鱼类。必须在尽可能短的时间内捕获尽可能大的部分，以便在每个站点或采样事件中获得最大数量的数据。对个人实施安乐死可能会导致收集的数据量大幅减少。除某些鲨鱼(板鳃鲨亚纲)或海龟(龟科)和鲟鱼(鲟科)等濒危物种外，可将整个捕获物视为采样而不进行替换。在这种情况下，由于时间和运输时间成本的限制，调查人员和机构可以获得安乐死标准做法的豁免。

8.2储存或送回水生栖息地

提交给IACUCs的动物使用申请通常要求主要研究人员描述鱼类或鱼类尸体的处置情况。无论是否需要，实验对象的最终处置方案应在研究研究计划中加以说明。根据发放科学采集许可证的机构之间的普遍共识，在野外采集并为实验或教学目的带入实验室的鱼类绝不应放回到环境中。经过适当的安乐死和保存后，研究动物可能再次作为教学或研究收藏的代金券标本5.2字段收集)．联邦、省、州或地方法律可能禁止在任何情况下释放研究动物。非本地鱼类绝不能放生。在某些情况下，转移到另一个研究项目或教育活动可能是一个适当的处置，在联邦政府列出的标本的情况下，可能需要许可。除了研究机构和当地政府制定的相关指南外，如果有适当的处置标准操作规程，也可以遵循。

9.未来修订

《准则》有必要定期修订(大约每5-8年修订一次)，最好由一个多学科委员会进行修订。虽然科学方法的基本哲学是相当不变的，但研究调查的具体技术和程序是随着时间而发展的，有时发展得相当快。鼓励调查人员向相关协会的官员发送新的信息和建设性的批评意见。

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扎勒，D. L.帕里什，T. M.萨顿，2013。BOB国际体育渔业技术，第三版。美国渔业协会，马里BOB国际体育兰州贝塞斯达。

附录

IACUC准备简要清单

下面的清单提供了研究人员在为机构动物护理和使用委员会(IACUCs)准备计划时应考虑的因素的快速参考(见IACUCs批准研究计划的2.1节)。此核对表不应取代指南中提供的更详细信息，但可用于记录目的，以确保计划的完整。

分类单元的选择
个人数量和选择
文献检索
种群和遗传因素
- 俘虏/国内股票
- 野生种群
- 受威胁或濒危物种
动物福利
生活条件和适应
水的质量
食物，饲料和喂养
健康
压力
应急准备
镇静
安乐死
许可证及规例

低监管优先级药物清单及其使用考虑

虽然技术上尚未批准用于鱼类，但低监管优先级(LRP)药物(附录表1)是美国兽医食品和药物管理中心(FDA CVM)认为对水生生物、人类消费者或环境的风险相对较小的化合物。FDA CVM表示，如果满足以下五个条件，就不太可能对LRP药物的使用进行监管:(1)该物质用于列出的适应症，(2)该物质在规定的水平上使用，(3)该物质根据良好的管理规范使用，(4)该物质是用于食用动物的适当等级，以及(5)不太可能对环境产生不利影响。

附录表1。低监管优先水产养殖药物、适应症和剂量。

复合	指示(s)	剂量
醋酸	鱼的杀菌剂	1000 - 2000 PPM浸1-10分钟
CaCL₂	用于帮助卵的粘附用于在鱼的保存和运输过程中帮助维持渗透平衡	10 - 20ppm碳酸钙_3.(鸡蛋)≤150ppm CaCO_3.，无限期(鱼)
曹	鱼类外用原生动物酸	2000 PPM浸入5秒
有限公司₂气体	鱼类麻醉剂
漂白土	用于降低鱼卵的粘附性
冰	用于降低鱼类在运输过程中的代谢率
MgSO₄	用于治疗外部单基因吸虫或甲壳类感染的鱼类	30000 ppm MgSO₄+ 7000 ppm NaCl浸泡5-10分钟
木瓜蛋白酶	用于去除鱼卵团中的胶质基质	0.2%的解决方案
氯化钾	用于帮助渗透调节，缓解压力，防止鱼休克	10 - 2000 ppm KCl
聚维酮碘	蛋面消毒剂	在水硬化期间或之后，100 PPM 10分钟
NaHCO_3.	用于介绍CO₂放入水中麻醉鱼	142-641 PPM 5分钟
生理盐水	用作渗透调节辅助，以减轻压力和防止鱼休克	0.5%-1.0%不定3%浸渍10-30分钟
Na₂所以₄	用于提高鱼卵的孵化率	15%溶液5-8分钟
盐酸硫胺素	用于预防或治疗鲑鱼硫胺素缺乏	水硬化时≤100ppm≤4 h≤1000ppm≤1h(囊炒)
尿素或单宁酸	用于降低鱼卵的粘附性	在3ppt尿素+ 4ppt NaCl中浸泡约6分钟，然后在150ppm单宁酸中单独浸泡约6分钟(处理大约4,000,000个鸡蛋)

附录表2。用于鱼类和两栖动物的世界动物卫生组织应报告的致病性病原体。

鱼病病原

丝囊霉属invadans(真菌)

是其中之一(寄生虫)

流行性造血坏死病毒

传染性造血坏死病毒

传染性鲑鱼贫血病毒

锦鲤疱疹病毒

红海鲷虹膜病毒

鲤鱼病毒的春季病毒血症

病毒性出血性败血症病毒

两栖类疾病病原体

壶菌

Ranavirus

国际兽疫局在《水生动物卫生法典》中在线公布了他们目前的清单http://www.oie.int/index.php?id=171&L=0&htmfile=titre_1.10.htm

术语和首字母缩略词索引

AADAP(水生动物药品批准合作项目 )............................................5、27

AFS(美国渔业协会 )..BOB国际体育....................................................................................Vi, viii, 2

AIFRB(美国渔业研究所的生物学家 )....................................................第六,2

蚜虫(动植物健康检查服务 )............................................................ 14日,52

美国社会ASIH(鱼类学家和爬虫类 )...............................................第六,2

兽医(美国兽医医学会 )...................................................................53

CFATS(化学工厂反恐标准 )................................................................52

濒危野生动植物种国际贸易公约。8、14

国土安全部(Department of Homeland Security) ).............................................................................. 52、53

DNA(脱氧核糖核酸 )..................................................................................................36、37

EPA(美国环境保护署 ).............................................................4 5 7 8 47

FDA(美国食品和药物管理局 ).......................................... 4、5、7、8,27岁,35岁,48岁,51岁,53岁

FDA CVM(美国食品和药物管理局兽药中心)........48 51 78

动物保护和使用委员会。9,2,3,13,15,20, 43, 48, 49, 53, 54, 77

INAD(临床实验的新动物 )...................................................................7 27 49 51

单体(低监管重点 )................................................................................. 7日,27日,48岁,49岁,78年

女士- 222(三卡因显示 )..................................................................... 25日,27日,48岁,50岁,53岁

国家卫生研究院(National Institutes of Health) )................................................................................................ 2

NOAA(美国国家海洋和大气管理局 )...................................................... 23

npd(国家污染物排放淘汰制度 )..................................................47、48

OIE(世界动物卫生组织[原国际兽疫局])9,12,40,69

小灵通(公共卫生服务 )..........................................................................................................12

坑(被动应答器集成 )......................................................................................34、35

PQAP(项目质量保证计划 )........................................................................................4

SOP(标准操作程序 )................................................................................. 3、4、5,28

SRAC(南部地区水产养殖中心 )....................................................27 31 44 53 81

美国农业部(美国农业部 )..............................................................12,13,40,52,74

USDHHS(美国卫生和人类服务 )......................................................... 2

物(美国鱼类和野生动物服务 ).................................................................5 14 23 27 49

附加阅读说明

2004年版的指南(研究委员会2004年鱼类的使用)在主题下列出了特定的引用，以增加对这些主题的理解和背景。UFR委员会建议，通过进行在线文献搜索，可以获得更多有关鱼类在研究中使用的最新信息。此外，有关的资源也可在下列地点找到:南部区域水产养殖中心(https://srac.tamu.edu/index.cfm/event/viewAllSheets/)．
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